| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-14页 |
| 縮略语表 | 第14-16页 |
| 第一章 文献综述与研究目的及意义 | 第16-53页 |
| 1 草鱼呼肠孤病毒 | 第16-23页 |
| ·草鱼出血病的研究历史 | 第16-17页 |
| ·草鱼出血病流行病学研究 | 第17页 |
| ·草鱼呼肠孤病毒的特征 | 第17-21页 |
| ·草鱼呼肠孤病毒形态特征 | 第17-19页 |
| ·草鱼呼肠孤病毒理化特性 | 第19页 |
| ·草鱼呼肠孤病毒细胞培养和感染特征 | 第19页 |
| ·草鱼呼肠孤病毒的基因组及其所编码的蛋白 | 第19-21页 |
| ·草鱼呼肠孤病毒的检测 | 第21-22页 |
| ·草鱼出血病防治方法 | 第22-23页 |
| ·疫苗预防 | 第22页 |
| ·药物防治 | 第22-23页 |
| ·生态防控 | 第23页 |
| 2 RNA干扰(RNA interference,RNAi) | 第23-38页 |
| ·RNAi的作用机制 | 第23-25页 |
| ·起始阶段 | 第24页 |
| ·效应阶段 | 第24页 |
| ·倍增阶段 | 第24-25页 |
| ·RNAi的作用特点 | 第25-26页 |
| ·siRNA的设计 | 第26页 |
| ·siRNA的制备 | 第26-27页 |
| ·siRNA表达载体 | 第27-28页 |
| ·siRNA的转染 | 第28-29页 |
| ·RNAi抗病毒研究 | 第29-37页 |
| ·病毒对RNAi的逃逸 | 第37-38页 |
| 3 RNAi技术在水生动物中的应用 | 第38-51页 |
| ·RNAi在水生动物应用的初步探讨 | 第38-39页 |
| ·RNAi在水生动物基因功能方面研究中的应用 | 第39-41页 |
| ·RNAi在抗水生动物病毒方面的应用 | 第41-49页 |
| ·RNAi抑制鱼类病毒病 | 第41-44页 |
| ·RNAi抑制甲壳类病毒病 | 第44-48页 |
| ·RNAi抑制蛙类病毒病 | 第48-49页 |
| ·RNAi在水生动物应用中的优化 | 第49页 |
| ·RNAi技术在水生生物中应用的问题与展望 | 第49-51页 |
| 5 选题的目的与意义 | 第51-53页 |
| 第二章 草鱼呼肠孤病毒流行毒株的分离鉴定 | 第53-74页 |
| 1 前言 | 第53-54页 |
| 2 材料与方法 | 第54-61页 |
| ·材料 | 第54-56页 |
| ·试验鱼 | 第54页 |
| ·细胞系 | 第54页 |
| ·试剂与耗材 | 第54-55页 |
| ·仪器设备 | 第55-56页 |
| ·实验方法 | 第56-61页 |
| ·病鱼寄生虫检查与细菌分离 | 第56页 |
| ·病鱼组织无菌匀浆液的制备 | 第56页 |
| ·人工感染试验 | 第56页 |
| ·细胞培养与病毒分离 | 第56-57页 |
| ·超薄切片电镜观察 | 第57页 |
| ·病毒的理化特性分析 | 第57页 |
| ·病毒基因组分析 | 第57-61页 |
| ·病毒纯化 | 第57-58页 |
| ·病毒核酸类型鉴定及SDS-PAGE分析 | 第58页 |
| ·病毒基因组S8节段的克隆 | 第58-61页 |
| 3 结果 | 第61-71页 |
| ·寄生虫检查及细菌分离 | 第61页 |
| ·人工感染实验 | 第61-62页 |
| ·细胞培养与病毒分离 | 第62-64页 |
| ·电镜观察 | 第64页 |
| ·病毒的理化特性 | 第64-66页 |
| ·病毒的基因组分析 | 第66-71页 |
| ·病毒核酸类型鉴定及基因组SDS-PAGE分析 | 第66-68页 |
| ·病毒基因组S8节段克隆与序列分析 | 第68-71页 |
| 4 讨论 | 第71-74页 |
| 第三章 载体转录siRNA抑制GCRV在CIK细胞中的复制 | 第74-91页 |
| 1 前言 | 第74-75页 |
| 2 材料与方法 | 第75-82页 |
| ·细胞和病毒 | 第75页 |
| ·主要试剂 | 第75-76页 |
| ·实验方法 | 第76-82页 |
| ·GCRV特异性siRNA的设计 | 第76-77页 |
| ·pSilencer2.1-U6 neo/siRNA载体的构建与鉴定 | 第77-80页 |
| ·重组载体转染CIK细胞及病毒感染细胞 | 第80-81页 |
| ·siRNA对细胞病变效应(CPE)的影响 | 第81页 |
| ·siRNA对病毒滴度的影响 | 第81页 |
| ·Real-time RT-PCR检测siRNA对病毒mRNA拷贝数的影响 | 第81-82页 |
| 3 结果 | 第82-87页 |
| ·重组载体的鉴定 | 第82-83页 |
| ·siRNA对GCRV引起的细胞病变效应的影响 | 第83-85页 |
| ·siRNA对GCRV病毒滴度的影响 | 第85-86页 |
| ·siRNA对GCRV RdRp和OCP mRNA拷贝数的影响 | 第86-87页 |
| 4 讨论 | 第87-91页 |
| 第四章 siRNA多表达载体抑制不同基因型GCRV分离株复制 | 第91-109页 |
| 1 前言 | 第91-92页 |
| 2 材料与方法 | 第92-99页 |
| ·细胞和病毒 | 第92页 |
| ·主要仪器及试剂 | 第92页 |
| ·实验方法 | 第92-99页 |
| ·siRNAs的设计及多表达载体的构建 | 第92-96页 |
| ·siRNAs多表达载体的鉴定 | 第96页 |
| ·siRNA多表达载体转染CIK细胞及两种GCRV感染细胞 | 第96-97页 |
| ·siRNA多表达载体的转染对细胞活性的影响 | 第97页 |
| ·多表达siRNA对细胞病变效应(CPE)的影响 | 第97页 |
| ·多表达siRNA对GCRV不同分离株病毒滴度的影响 | 第97-98页 |
| ·Real-time RT-PCR检测多表达siRNA对不同GCRV分离株mRNA拷贝数的影响 | 第98-99页 |
| 3 结果 | 第99-106页 |
| ·siRNA多表达载体的鉴定 | 第99-101页 |
| ·细胞活性分析 | 第101页 |
| ·siRNA多表达载体对不同基因型GCRV分离株引起的细胞病变效应的影响 | 第101-104页 |
| ·siRNA多表达载体对不同基因型GCRV分离株病毒滴度的影响 | 第104-105页 |
| ·siRNA多表达载体对不同基因型GCRV分离株mRNA拷贝数的影响 | 第105-106页 |
| 4 讨论 | 第106-109页 |
| 主要研究结果 | 第109-111页 |
| 附录 | 第111-112页 |
| 参考文献 | 第112-128页 |
| 致谢 | 第128-130页 |
| 在读期间发表论文 | 第130页 |
