| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 目录 | 第9-11页 |
| 前言 | 第11-21页 |
| 1 概述 | 第11页 |
| 2 干扰素的分类及产生 | 第11-12页 |
| 3 α干扰素的结构特征及一般特性 | 第12-13页 |
| 4 α干扰素受体 | 第13页 |
| 5 α干扰素的生物学活性 | 第13-16页 |
| ·抗病毒作用 | 第13-14页 |
| ·抗肿瘤作用 | 第14-15页 |
| ·抗寄生虫作用 | 第15页 |
| ·免疫调节作用 | 第15-16页 |
| ·免疫佐剂作用 | 第16页 |
| 6 禽类α干扰素的研究进展 | 第16-17页 |
| 7 禽痘病毒载体及其应用 | 第17-18页 |
| 8 本试验的立题依据、目的和意义 | 第18-21页 |
| 材料与方法 | 第21-36页 |
| 1 试验材料 | 第21-23页 |
| ·试验动物 | 第21页 |
| ·主要试剂 | 第21页 |
| ·质粒 | 第21页 |
| ·主要仪器设备 | 第21-22页 |
| ·试验所需溶液及其配制 | 第22-23页 |
| 2 试验方法 | 第23-36页 |
| ·引物的设计与合成 | 第23页 |
| ·延边饲养鹅外周血单核细胞的分离及诱导 | 第23-24页 |
| ·外周血单核细胞总RNA的提取 | 第24页 |
| ·RT-PCR扩增延边饲养鹅α干扰素基因 | 第24-26页 |
| ·目的基因纯化回收 | 第26页 |
| ·目的基因TA克隆 | 第26页 |
| ·质粒转化 | 第26-27页 |
| ·克隆质粒提取 | 第27页 |
| ·克隆质粒鉴定及序列分析 | 第27页 |
| ·pET-30a-IFN-α原核表达质粒的构建及鉴定 | 第27-28页 |
| ·重组表达质粒的诱导表达及包涵体鉴定 | 第28页 |
| ·重组蛋白SDS-PAGE电泳分析 | 第28-29页 |
| ·重组蛋白纯化 | 第29页 |
| ·重组蛋白Western blot分析 | 第29页 |
| ·多克隆抗体制备 | 第29-30页 |
| ·多克隆抗体效价检测 | 第30页 |
| ·鸡胚成纤维细胞(CEF)制备 | 第30页 |
| ·FPV-017种毒扩大培养 | 第30页 |
| ·目的基因TA克隆 | 第30-31页 |
| ·重组禽痘病毒转移载体构建 | 第31-33页 |
| ·pSY681-LP2EP2-IFN-α-Lac Z质粒与FPV-017共转染鸡胚成纤维细胞(CEF) | 第33页 |
| ·重组禽痘病毒筛选与纯化 | 第33-34页 |
| ·重组禽痘病毒α干扰素基因PCR鉴定 | 第34页 |
| ·重组禽痘病毒间接免疫荧光鉴定 | 第34页 |
| ·重组禽痘病毒western blot鉴定 | 第34页 |
| ·抗病毒活性检测 | 第34-36页 |
| 结果 | 第36-47页 |
| 1 延边饲养鹅α干扰素基因RT-PCR扩增及克隆质粒鉴定 | 第36-37页 |
| 2 延边饲养鹅α干扰素基因序列测定及分析 | 第37-38页 |
| 3 重组表达质粒pET-30a-IFN-α鉴定 | 第38-39页 |
| 4 重组质粒诱导表达 | 第39页 |
| 5 重组蛋白存在形式鉴定 | 第39-40页 |
| 6 重组蛋白纯化 | 第40页 |
| 7 重组蛋白Western blot分析 | 第40-41页 |
| 8 多克隆抗体效价测定 | 第41页 |
| 9 延边饲养鹅IFN-α基因RT-PCR扩增及克隆质粒鉴定 | 第41-42页 |
| 10 pSY538-IFN-α重组质粒构建 | 第42-43页 |
| 11 pSY681-LP2EP2-IFN-α重组质粒构建 | 第43页 |
| 12 pSY681-LP2EP2-IFN-α-Lac Z重组质粒构建 | 第43-44页 |
| 13 重组禽痘病毒的获得 | 第44页 |
| 14 重组禽痘病毒α干扰素基因PCR鉴定 | 第44-45页 |
| 15 重组病毒的Western-blot鉴定和间接免疫荧光鉴定结果 | 第45-46页 |
| 16 抗病毒活性检测 | 第46-47页 |
| 讨论 | 第47-51页 |
| 总结 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 作者简介 | 第58页 |
