| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 目录 | 第10-12页 |
| 第一部分 文献综述 | 第12-26页 |
| 第一章 p53 基因研究进展 | 第12-21页 |
| ·p53 基因的发现 | 第12页 |
| ·p53 基因的表达及分子结构 | 第12-14页 |
| ·p53 基因的功能 | 第14-16页 |
| ·p53 与生殖细胞 | 第16-18页 |
| ·p53 在雄性生殖细胞中研究 | 第16-17页 |
| ·p53 在雌性生殖细胞中研究 | 第17-18页 |
| ·p53 基因家族成员 | 第18-21页 |
| 第二章 卵子 DNA 损伤的研究进展 | 第21-26页 |
| ·DNA 损伤与基因表达 | 第21-22页 |
| ·卵母细胞的 DNA 损伤修复 | 第22-24页 |
| ·胚胎过程中 DNA 损伤修复 | 第24-26页 |
| 第二部分 实验研究 | 第26-44页 |
| 第三章 p53 基因真核表达载体 pp53-venus 的构建 | 第26-32页 |
| ·材料和方法 | 第26-28页 |
| ·仪器和设备 | 第26页 |
| ·实验材料和试剂 | 第26-27页 |
| ·牛 p53 基因全长克隆及序列鉴定 | 第27页 |
| ·pp53-venus 真核表达载体的构建 | 第27页 |
| ·重组质粒 pp53-venus 转染 Hela 细胞 | 第27-28页 |
| ·用 RT-PCR 方法鉴定 pp53-venus 在细胞中的表达 | 第28页 |
| ·实验结果 | 第28-31页 |
| ·牛 p53 基因克隆及其序列分析 | 第28-29页 |
| ·pp53-venus 真核表达载体的双酶切鉴定 | 第29页 |
| ·pp53-venus 真核表达载体在 Hela 细胞中的表达定位情况 | 第29-30页 |
| ·RT-PCR 分析 pp53-venus 重组质粒在 Hela 细胞中的表达情况 | 第30-31页 |
| ·讨论 | 第31页 |
| ·总结 | 第31-32页 |
| 第四章 p53 对牛卵母细胞体外成熟的影响 | 第32-44页 |
| ·材料和方法 | 第32-36页 |
| ·仪器和设备 | 第32页 |
| ·试剂和溶液配制 | 第32-33页 |
| ·实验材料 | 第33页 |
| ·卵母细胞收集 | 第33页 |
| ·卵母细胞的体外成熟培养 | 第33-34页 |
| ·卵丘细胞的原代培养及饲养层的制备 | 第34页 |
| ·卵母细胞的孤雌激活及囊胚培养 | 第34页 |
| ·p53-venus mRNA 的体外转录 | 第34页 |
| ·p53-venus mRNA 以及 siRNA 的显微注射 | 第34-35页 |
| ·实时定量 PCR 检测 p53 在牛卵母细胞不同时期表达量的变化 | 第35-36页 |
| ·免疫荧光观察纺锤体形态 | 第36页 |
| ·结果与分析 | 第36-42页 |
| ·p53-venus mRNA 的体外转录 | 第36-37页 |
| ·实时定量 PCR 检测 p53 在牛卵母细胞中的表达 | 第37-38页 |
| ·观察 p53 在牛卵母细胞中的表达定位 | 第38-39页 |
| ·超表达 p53 对牛卵母细胞的影响 | 第39-40页 |
| ·干扰 p53 对牛卵母细胞的影响 | 第40-41页 |
| ·免疫荧光观察纺锤体形态 | 第41-42页 |
| ·讨论 | 第42-43页 |
| ·总结 | 第43-44页 |
| 结论 | 第44页 |
| 本研究创新点与进一步研究课题 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 作者简介 | 第55页 |
