| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 缩略语表 | 第12-13页 |
| 第1章 文献综述 | 第13-23页 |
| ·副猪嗜血杆菌流行病学研究进展 | 第13-14页 |
| ·血清学分型 | 第13页 |
| ·基因分型 | 第13-14页 |
| ·致病性研究进展 | 第14-18页 |
| ·致病机理的研究 | 第14页 |
| ·致病因子的相关研究 | 第14-18页 |
| ·诊断方法的研究进展 | 第18-20页 |
| ·细菌的分离培养和生化鉴定 | 第18页 |
| ·分子生物学诊断方法 | 第18-19页 |
| ·免疫组化诊断方法 | 第19页 |
| ·血清学诊断方法 | 第19-20页 |
| ·疫苗研究进展 | 第20-23页 |
| ·全菌灭活疫苗 | 第21-22页 |
| ·基因工程亚单位疫苗 | 第22-23页 |
| 第2章 副猪嗜血杆菌OMPP5、CDTABC基因的克隆表达及免疫原性分析 | 第23-43页 |
| ·材料 | 第23-25页 |
| ·菌种、质粒 | 第23页 |
| ·主要试剂 | 第23页 |
| ·实验动物 | 第23页 |
| ·主要培养基及相关试剂的配制 | 第23-25页 |
| ·实验方法 | 第25-34页 |
| ·引物的设计 | 第25页 |
| ·副猪嗜血杆菌SH0165菌株的复苏 | 第25页 |
| ·副猪嗜血杆菌SH0165菌株全菌基因组DNA的提取 | 第25-26页 |
| ·PCR扩增靶基因 | 第26页 |
| ·PCR产物回收与纯化 | 第26-27页 |
| ·目的片段与表达载体的双酶切与回收 | 第27-28页 |
| ·目的基因与载体的连接 | 第28页 |
| ·E.coliDH5a感受态细胞的制备 | 第28页 |
| ·连接产物的转化 | 第28-29页 |
| ·质粒的小量提取 | 第29页 |
| ·重组质粒的PCR鉴定 | 第29页 |
| ·重组质粒的双酶切鉴定 | 第29页 |
| ·E.coliBL21(DE3)感受态细胞的制备 | 第29-30页 |
| ·重组质粒的诱导表达 | 第30页 |
| ·SDS-PAGE鉴定 | 第30页 |
| ·包涵体的复性 | 第30-31页 |
| ·重组蛋白浓度的测定(Bradford法) | 第31页 |
| ·重组蛋白的Western-Blot检测 | 第31-32页 |
| ·小鼠的免疫及攻毒试验 | 第32页 |
| ·攻毒 | 第32-33页 |
| ·血清特异性抗体检测 | 第33-34页 |
| ·结果与分析 | 第34-41页 |
| ·omp5、cdtABC基因的克隆及重组质粒的构建 | 第34-36页 |
| ·重组蛋白的诱导表达及纯化 | 第36-37页 |
| ·组蛋白的Western-Blot免疫验证 | 第37页 |
| ·鼠血清特异性抗体动态变化 | 第37-39页 |
| ·副猪嗜血杆菌对Balb/C小鼠的致病性试验 | 第39-40页 |
| ·Balb/C小鼠免疫攻毒保护试验 | 第40-41页 |
| ·讨论 | 第41-43页 |
| 第3章 副猪嗜血杆菌间接ELISA检测方法的建立及应用 | 第43-54页 |
| ·材料 | 第43页 |
| ·主要试剂 | 第43页 |
| ·试验菌株和血清 | 第43页 |
| ·试验器材 | 第43页 |
| ·试验方法 | 第43-46页 |
| ·间接ELISA包被抗原的制备 | 第43-44页 |
| ·间接ELISA方法的操作程序 | 第44页 |
| ·间接ELISA方法条件的优化 | 第44-45页 |
| ·间接ELISA方法的应用 | 第45-46页 |
| ·结果与分析 | 第46-52页 |
| ·间接ELISA最优反应条件 | 第46-49页 |
| ·检测全菌免疫鼠血清 | 第49-50页 |
| ·检测不同血清型HPS免疫兔血清 | 第50-51页 |
| ·检测临床猪血清 | 第51-52页 |
| ·讨论 | 第52-54页 |
| 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-62页 |
| 致谢 | 第62页 |
