| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩略语表 | 第11-12页 |
| 第1章 猪链球菌研究进展 | 第12-25页 |
| 1 猪链球菌病 | 第12页 |
| 2 病原学 | 第12-13页 |
| 3 病理学特点 | 第13页 |
| 4 猪链球菌的鉴定 | 第13-14页 |
| 5 流行病学 | 第14页 |
| 6 致病机制 | 第14-17页 |
| 7 毒力因子 | 第17-25页 |
| ·荚膜多糖(capsular polysaccharide,CPS) | 第18页 |
| ·溶血素(suilysin) | 第18-19页 |
| ·溶菌酶释放蛋白(muramidase-released protein,MRP)和胞外因子(extracellular factor,EF) | 第19页 |
| ·粘附素 | 第19-20页 |
| ·44KD和IgG结合蛋白 | 第20页 |
| ·3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH) | 第20页 |
| ·纤连蛋白(Fibronectin,Fn)和血纤蛋白原(Fibrinogen,Fgn)的结合蛋白(FBPS) | 第20-21页 |
| ·Enolase | 第21页 |
| ·ORF2 | 第21页 |
| ·89kb毒力岛 | 第21页 |
| ·分泌性核酸酶SsnA基因 | 第21-22页 |
| ·转录调节因子、氨基酸通透酶、ABC转运子及表面锚定蛋白基因 | 第22页 |
| ·浑浊因子 | 第22-23页 |
| ·菌毛 | 第23页 |
| ·肽多糖 | 第23-25页 |
| 第2章 猪链球菌2型Ⅲ型溶血素基因的功能研究 | 第25-45页 |
| 1 前言 | 第25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-35页 |
| ·材料 | 第25-27页 |
| ·菌株 | 第25页 |
| ·质粒 | 第25页 |
| ·实验动物 | 第25-26页 |
| ·主要试剂及溶液配制 | 第26-27页 |
| ·细菌培养基 | 第27页 |
| ·质粒提取用缓冲液 | 第27页 |
| ·方法 | 第27-35页 |
| ·引物设计 | 第27-28页 |
| ·细菌的培养 | 第28页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第28-29页 |
| ·sly基因缺失菌株的构建 | 第29-33页 |
| ·sly基因缺失过程中的同源重组示意图 | 第29页 |
| ·sly左右臂的克隆 | 第29-30页 |
| ·PCR产物胶的回收 | 第30页 |
| ·酶切左臂和质粒 | 第30-31页 |
| ·左臂与载体的连接 | 第31页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第31页 |
| ·连接产物的转化 | 第31-32页 |
| ·酶切右臂和质粒 | 第32页 |
| ·右臂与载体的连接及连接产物的转化 | 第32页 |
| ·SC-19感受态细胞的制备 | 第32页 |
| ·sly基因缺失载体的电转 | 第32页 |
| ·△sly基因缺失突变菌株的筛选 | 第32-33页 |
| ·slyrp基因缺失菌株的构建 | 第33页 |
| ·sly,slyrp双基因缺失菌株的构建 | 第33页 |
| ·基因缺失菌株的生长特性试验 | 第33页 |
| ·溶血活性测定 | 第33-34页 |
| ·猪血红细胞的制备 | 第33-34页 |
| ·溶血活性试验 | 第34页 |
| ·小鼠致病力试验 | 第34页 |
| ·细菌计数 | 第34页 |
| ·人工感染 | 第34页 |
| ·细胞吞噬试验 | 第34-35页 |
| ·小鼠单核巨噬细胞RAW264.7的传代培养 | 第34-35页 |
| ·细胞计数 | 第35页 |
| ·细菌与细胞的相互作用 | 第35页 |
| 3 结果 | 第35-43页 |
| ·sly基因缺失菌株的构建 | 第36-38页 |
| ·sly基因敲除载体的构建 | 第36-37页 |
| ·sly同源臂的扩增 | 第36页 |
| ·sly基因缺失载体的鉴定 | 第36-37页 |
| ·△sly基因缺失菌株的筛选 | 第37-38页 |
| ·slyrp基因缺失菌株的构建 | 第38-39页 |
| ·slyrp基因敲除载体的构建 | 第38-39页 |
| ·slyrp同源臂的扩增 | 第38页 |
| ·slyrp基因缺失载体的鉴定 | 第38-39页 |
| ·△slyrp基因缺失菌株的筛选 | 第39页 |
| ·双基因缺失突变菌株△sly/△slyrp的构建 | 第39-40页 |
| ·生长特性结果 | 第40页 |
| ·溶血活性结果 | 第40-41页 |
| ·小鼠致病力试验结果 | 第41-42页 |
| ·细胞吞噬试验结果 | 第42-43页 |
| ·细胞计数结果 | 第42页 |
| ·细菌与细胞相互作用结果 | 第42-43页 |
| 4 讨论 | 第43-44页 |
| 5 小结 | 第44-45页 |
| 第3章 猪链球菌2型弱毒疫苗初探 | 第45-53页 |
| 摘要 | 第45-46页 |
| Abstract | 第46-47页 |
| 1 前言 | 第47页 |
| 2 材料与方法 | 第47-49页 |
| ·材料 | 第47-48页 |
| ·菌株 | 第47-48页 |
| ·质粒 | 第48页 |
| ·试剂及培养液 | 第48页 |
| ·实验动物 | 第48页 |
| ·方法 | 第48-49页 |
| ·构建双基因缺失突变菌株△0197/△sly | 第48页 |
| ·细菌的培养及计数 | 第48页 |
| ·人工感染仔猪 | 第48-49页 |
| ·人工感染仔猪的血中含菌量测定 | 第49页 |
| ·人工感染仔猪的体温测定 | 第49页 |
| ·感染仔猪的CPS抗体检测 | 第49页 |
| 3 结果 | 第49-51页 |
| ·人工感染后仔猪的存活率及发病率 | 第49-50页 |
| ·人工感染后仔猪血液含菌量 | 第50页 |
| ·感染仔猪的体温变化 | 第50-51页 |
| ·ELISA检测CPS抗体结果 | 第51页 |
| 4 讨论 | 第51-52页 |
| 5 小结 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 附录 | 第62页 |
