| 缩略词表 | 第1-4页 |
| 中文摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 第一章 文献综述及选题的目的和意义 | 第10-19页 |
| 1 日本乙型脑炎病原简介 | 第10-13页 |
| ·病原特征 | 第10-11页 |
| ·基因组结构 | 第11页 |
| ·日本乙型脑炎病毒的主要蛋白 | 第11-13页 |
| 2 NS3蛋白在病毒复制过程中的研究概况 | 第13-16页 |
| ·NS3的结构 | 第13-15页 |
| ·NS3蛋白与病毒复制相关的三种酶活性 | 第15-16页 |
| 3 NS3在疾病治疗中的研究进展 | 第16-17页 |
| ·NS3抗病毒研究 | 第16页 |
| ·NS3蛋白致凋亡及致癌作用 | 第16页 |
| ·NS3蛋白与致细胞病变的关系 | 第16-17页 |
| 4 展望 | 第17页 |
| 5 研究的目的与意义 | 第17-19页 |
| 第二章 乙型脑炎病毒NS3蛋白的原核表达与多克隆抗体的制备 | 第19-38页 |
| 1 实验材料 | 第19-21页 |
| ·实验材料 | 第19页 |
| ·主要试剂及试剂的配制 | 第19-21页 |
| ·主要仪器 | 第21页 |
| 2 实验方法 | 第21-30页 |
| ·JEV基因组RNA的提取 | 第21-23页 |
| ·JEV NS3基因的PCR扩增 | 第23-24页 |
| ·NS3基因PCR产物的TA克隆 | 第24-25页 |
| ·重组质粒的初步鉴定 | 第25-26页 |
| ·JEV NS3基因原核表达载体的构建 | 第26-27页 |
| ·重组JEV NS3蛋白的诱导表达及条件的优化 | 第27-28页 |
| ·NS3重组蛋白的纯化与复性 | 第28-29页 |
| ·NS3多克隆抗体的制备及其效价测定 | 第29-30页 |
| 3 结果与分析 | 第30-36页 |
| ·NS3基因TA克隆质粒双酶切鉴定 | 第30-31页 |
| ·NS3基因原核表达载体双酶切鉴定 | 第31页 |
| ·NS3重组蛋白的表达及条件的优化 | 第31-34页 |
| ·NS3重组蛋白的纯化 | 第34-35页 |
| ·NS3多克隆抗体特异性检测 | 第35-36页 |
| 4 讨论 | 第36-38页 |
| 第三章 日本脑炎病毒NS3蛋白对对其体外复制能力的影响 | 第38-58页 |
| 1 实验材料和方法 | 第38-40页 |
| ·细胞、毒株和菌体 | 第38页 |
| ·主要试剂及试剂的配制 | 第38-39页 |
| ·主要仪器 | 第39-40页 |
| 2 实验方法 | 第40-47页 |
| ·NS3蛋白对BHK-21毒性的测定 | 第40页 |
| ·BHK-21的培养和JEV接种 | 第40页 |
| ·荧光定量RT-PCR引物以及NS3基因引物的设计合成 | 第40页 |
| ·NS3基因的PCR扩增 | 第40-41页 |
| ·NS3基因PCR产物的TA克隆 | 第41-43页 |
| ·标准样品的制备 | 第43-44页 |
| ·FQ-PCR标准曲线的制备 | 第44页 |
| ·去内毒素重组质粒的提取 | 第44-45页 |
| ·细胞的转染及表达产物的鉴定 | 第45-46页 |
| ·NS3蛋白对病毒复制的影响 | 第46页 |
| ·总RNA的提取 | 第46页 |
| ·荧光定量RT-PCR检测 | 第46-47页 |
| 3 实验结果 | 第47-56页 |
| ·NS3蛋白对BHK-21毒性的测定 | 第47页 |
| ·标准重组质粒E-19T的构建 | 第47-48页 |
| ·NS3基因TA克降质粒双酶切鉴定 | 第48-49页 |
| ·真核质粒pCI-neo-NS3扩增与构建 | 第49页 |
| ·NS3基因在BHK-21细胞内表达的检测 | 第49-50页 |
| ·JEV荧光RT-PCR标准曲线的制作 | 第50页 |
| ·NS3蛋白对病毒复制能力的影响 | 第50-56页 |
| 4 讨论 | 第56-58页 |
| 全文总结 | 第58-59页 |
| 参考文献(References) | 第59-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 附录 | 第65-67页 |
| 作者简介以及攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第67页 |
