| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 目录 | 第9-12页 |
| 中英符号缩略词表 | 第12-13页 |
| 前言 | 第13-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-29页 |
| ·黄瓜花叶病毒研究现状 | 第14-16页 |
| ·生物学特性 | 第14页 |
| ·CMV 基因组结构 | 第14-15页 |
| ·CMV 株系划分的研究 | 第15-16页 |
| ·番茄花叶病毒研究现状 | 第16-18页 |
| ·生物学特性 | 第16页 |
| ·ToMV 基因组结构 | 第16-17页 |
| ·番茄花叶病毒抗病基因的研究 | 第17-18页 |
| ·基因工程在抗病毒中的应用 | 第18-23页 |
| ·利用来源病毒的基因 | 第18-21页 |
| ·利用植物自身的基因 | 第21-23页 |
| ·多基因策略 | 第23页 |
| ·RNAi 技术在植物中的应用 | 第23-29页 |
| ·RNAi 技术的发展 | 第23页 |
| ·RNAi 抗病毒机制 | 第23-26页 |
| ·RNAi 的特点 | 第26-27页 |
| ·RNAi 在植物抗病毒中的应用 | 第27-29页 |
| 第二章 RNAi 载体的构建 | 第29-51页 |
| ·试验材料 | 第29页 |
| ·菌株与质粒 | 第29页 |
| ·毒源 | 第29页 |
| ·主要试剂 | 第29页 |
| ·培养基 | 第29页 |
| ·主要仪器设备 | 第29页 |
| ·试验方法 | 第29-41页 |
| ·烟草总 RNA 提取 | 第29-30页 |
| ·cDNA 的合成 | 第30页 |
| ·PCR 引物的设计与合成 | 第30-31页 |
| ·PCR 产物的回收 | 第31-32页 |
| ·扩增产物的克隆 | 第32-33页 |
| ·RNAi 载体的构建策略 | 第33-36页 |
| ·植物表达载体 pBi35STC4 的构建 | 第36-39页 |
| ·植物表达载体 pBi35STC9 的构建 | 第39-40页 |
| ·植物表达载体 pBi35STC12 的构建 | 第40-41页 |
| ·植物表达载体 pBi35STC14 的构建 | 第41页 |
| ·结果与分析 | 第41-49页 |
| ·植物表达载体 pBi35STC4 的构建 | 第41-43页 |
| ·植物表达载体 pBi35STC9 的构建 | 第43-45页 |
| ·植物表达载体 pBi35STC12 的构建 | 第45-47页 |
| ·植物表达载体 pBi35STC14 的构建 | 第47-49页 |
| ·小结 | 第49-51页 |
| 第三章 烟草遗传转化及 RNAi 干扰效果初步评价 | 第51-68页 |
| ·试验材料 | 第51-52页 |
| ·菌株 | 第51页 |
| ·植物材料 | 第51页 |
| ·毒源 | 第51页 |
| ·主要试剂 | 第51页 |
| ·培养基 | 第51-52页 |
| ·试验方法 | 第52-55页 |
| ·根癌农杆菌 GV3101 感受态细胞制备 | 第52页 |
| ·农杆菌转化-电击转化 | 第52页 |
| ·转化子的鉴定及保存 | 第52页 |
| ·烟草无菌苗的培育 | 第52页 |
| ·侵染液制备 | 第52-53页 |
| ·烟草的转化及再生 | 第53页 |
| ·转基因烟草苗的驯化和移栽 | 第53页 |
| ·转基因烟草的鉴定 | 第53-54页 |
| ·病毒接种 | 第54-55页 |
| ·Trizol 法提取 RNA 方法 | 第55页 |
| ·转基因烟草的接种处理 | 第55页 |
| ·结果与分析 | 第55-67页 |
| ·转 pBi35STC4 载体烟草的筛选与分子检测 | 第55-57页 |
| ·转 pBi35STC9 载体烟草的筛选与分子检测 | 第57-58页 |
| ·转 pBi35STC12 载体烟草的筛选与分子检测 | 第58-59页 |
| ·转 pBi35STC14 载体烟草的筛选与分子检测 | 第59-60页 |
| ·载体 pBi35STC4 的干扰效果评价 | 第60-61页 |
| ·载体 pBi35STC9 的干扰效果评价 | 第61-62页 |
| ·载体 pBi35STC12 的干扰效果评价 | 第62-65页 |
| ·载体 pBi35STC14 的干扰效果评价 | 第65-67页 |
| ·小结 | 第67-68页 |
| 第四章 加工番茄遗传转化及 RNAi 干扰效果的初步评价 | 第68-84页 |
| ·试验材料 | 第68-69页 |
| ·菌株 | 第68页 |
| ·植物材料 | 第68页 |
| ·毒源 | 第68页 |
| ·主要试剂 | 第68页 |
| ·培养基 | 第68-69页 |
| ·试验方法 | 第69-71页 |
| ·根癌农杆菌 GV3101 感受态细胞制备和农杆菌转化 | 第69页 |
| ·加工番茄无菌苗的培育 | 第69页 |
| ·外植体的预培养 | 第69页 |
| ·侵染液的制备 | 第69页 |
| ·加工番茄的转化及再生 | 第69-70页 |
| ·加工番茄再生芽诱导筛选 | 第70页 |
| ·加工番茄的生根和转基因加工番茄的移栽 | 第70-71页 |
| ·病毒接种 | 第71页 |
| ·Trizol 法提取 RNA 方法 | 第71页 |
| ·转基因加工番茄的接种处理 | 第71页 |
| ·结果与分析 | 第71-82页 |
| ·转基因加工番茄的再生 | 第71页 |
| ·转 pBi35STC4 载体加工番茄的筛选与分子检测 | 第71-72页 |
| ·转 pBi35STC12 载体加工番茄的筛选与分子检测 | 第72-73页 |
| ·转 pBi35STC14 载体加工番茄的筛选与分子检测 | 第73-74页 |
| ·加工番茄遗传转化体系的建立 | 第74-78页 |
| ·载体 pBi35STC4 的干扰效果评价 | 第78-80页 |
| ·载体 pBi35STC12 的干扰效果评价 | 第80-81页 |
| ·载体 pBi35STC14 的干扰效果评价 | 第81-82页 |
| ·小结 | 第82-84页 |
| 第五章 结论与讨论 | 第84-86页 |
| 参考文献 | 第86-97页 |
| 附录一 各干扰片段的核苷酸序列 | 第97-99页 |
| 附录二 主要培养基、溶液配制 | 第99-102页 |
| 致谢 | 第102-103页 |
| 作者简介 | 第103-104页 |
| 导师评阅表 | 第104页 |
