| 附件 | 第1-6页 |
| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-15页 |
| 英文缩略表 | 第15-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-31页 |
| ·前言 | 第16页 |
| ·固氮的遗传基础——固氮基因簇 | 第16-17页 |
| ·共有固氮基因的鉴定 | 第17-18页 |
| ·不同固氮菌中固氮基因簇结构与进化分析 | 第18-23页 |
| ·变形菌门（Proteobacteria）微生物中的固氮基因簇 | 第18-19页 |
| ·蓝细菌门（Cyanobacteria）微生物中的固氮基因簇 | 第19-20页 |
| ·放线菌门（Actinobacteria）微生物中的固氮基因簇 | 第20-21页 |
| ·厚壁菌门（Firmicutes）微生物中的固氮基因簇 | 第21-22页 |
| ·绿弯菌门（Chloroflexi）微生物中的固氮基因簇 | 第22页 |
| ·绿菌门（Chlorobi）微生物中的固氮基因簇 | 第22-23页 |
| ·广古菌门（Euryarchaeota）微生物中的固氮基因簇 | 第23页 |
| ·固氮基因水平转移 | 第23-25页 |
| ·氮代谢调节 | 第25-29页 |
| ·肠杆菌中一般氮代谢调节 | 第26页 |
| ·生物固氮的调控 | 第26-29页 |
| ·立题依据和技术路线 | 第29-31页 |
| ·立题依据及本研究的目的意义 | 第29-30页 |
| ·技术路线 | 第30-31页 |
| 第二章 DH10B GlnG 与 A1501 NtrC 结构的生物信息学分析 | 第31-38页 |
| ·材料与方法 | 第31页 |
| ·数据库 | 第31页 |
| ·应用软件 | 第31页 |
| ·结果与讨论 | 第31-36页 |
| ·DH10B GlnG 与 A1501 NtrC 进化分析 | 第31-32页 |
| ·DH10B GlnG 与 A1501 NtrC 结构比较 | 第32-35页 |
| ·DH10B GlnG 与 A1501 NtrC 结构域分析 | 第35页 |
| ·肠杆菌 GlnG 与假单胞菌 NtrC 结合的 DNA 序列分析 | 第35-36页 |
| ·讨论 | 第36-38页 |
| 第三章 DH10B GlnG 与 A1501 NtrC 在一般氮代谢过程中的功能互补研究 | 第38-67页 |
| ·材料与方法 | 第38-54页 |
| ·菌株、质粒来源 | 第38页 |
| ·培养基及溶液 | 第38-40页 |
| ·抗生素、酶类及生化试剂 | 第40页 |
| ·试剂盒 | 第40-41页 |
| ·仪器设备 | 第41页 |
| ·基因组及质粒 DNA 的提取 | 第41-44页 |
| ·PCR 反应及产物纯化 | 第44-46页 |
| ·目的片段连接 T 载体 | 第46页 |
| ·目的片段的酶切及纯化 | 第46-48页 |
| ·DNA 片段与目的载体的连接 | 第48页 |
| ·大肠杆菌的热击转化 | 第48-49页 |
| ·三亲结合实验 | 第49-50页 |
| ·以硝酸钾或尿素为唯一氮源条件下的生长曲线测定 | 第50页 |
| ·施氏假单胞菌固氮酶活测定 | 第50-51页 |
| ·大肠杆菌 GlnG 突变株的构建 | 第51-52页 |
| ·大肠杆菌的电击转化 | 第52-53页 |
| ·以精氨酸为唯一氮源条件下的生长曲线测定 | 第53-54页 |
| ·结果 | 第54-64页 |
| ·DH10B GlnG 互补 A1501 △NtrC 功能互补株的构建 | 第54-59页 |
| ·DH10B GlnG 互补 A1501 △NtrC 功能互补株的表型测定 | 第59-61页 |
| ·A1501 NtrC 互补 DH10B △GlnG 功能互补株的构建 | 第61-63页 |
| ·A1501 NtrC 回补 DH10B △GlnG 的功能互补株的表型测定 | 第63-64页 |
| ·讨论 | 第64-67页 |
| 第四章 DH10B GlnG 与 A1501 nifA 基因启动子区互作研究 | 第67-102页 |
| ·材料与方法 | 第67-83页 |
| ·菌株、质粒来源 | 第67页 |
| ·培养基及溶液 | 第67-69页 |
| ·抗生素、酶类及生化试剂 | 第69-70页 |
| ·试剂盒 | 第70页 |
| ·仪器设备 | 第70页 |
| ·试剂盒法提取质粒 DNA | 第70-71页 |
| ·PCR 反应及产物纯化 | 第71-74页 |
| ·目的片段连接 T 载体 | 第74页 |
| ·目的片段的酶切及纯化 | 第74-75页 |
| ·DNA 片段与目的载体的连接 | 第75页 |
| ·大肠杆菌的热击转化 | 第75-76页 |
| ·GlnG-P 蛋白的表达与纯化 | 第76-79页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第79-80页 |
| ·凝胶阻滞实验 | 第80-82页 |
| ·高效液相色谱法鉴定 EN-01 固氮条件下产生的有机酸 | 第82-83页 |
| ·结果 | 第83-99页 |
| ·通过融合 PCR 的方式实现 DH10B glnG 基因片段的定点突变 | 第83-87页 |
| ·磷酸化 DH10B GlnG（GlnG-P）克隆载体的构建 | 第87-89页 |
| ·磷酸化 DH10B GlnG（GlnG-P）表达载体的构建 | 第89-92页 |
| ·共表达蛋白 GlnG-P-Mxe-CBD 的诱导表达 | 第92-95页 |
| ·共表达蛋白 GlnG-P-Mxe-CBD 的纯化 | 第95-96页 |
| ·A1501 nifA 基因启动子区可能的 GlnG 结合位点分析 | 第96-97页 |
| ·凝胶阻滞实验探针的制备 | 第97页 |
| ·凝胶阻滞实验分析磷酸化 GlnG 蛋白与 nifA 基因启动子区的结合 | 第97-98页 |
| ·重组大肠杆菌 EN-01 固氮过程中产有机酸分析 | 第98-99页 |
| ·讨论 | 第99-102页 |
| ·凝胶阻滞实验分析磷酸化 GlnG 蛋白与目的基因启动子区的结合 | 第99-100页 |
| ·EN-01 固氮过程中产有机酸与能量代谢之间的关系分析 | 第100-102页 |
| 第五章 全文结论 | 第102-103页 |
| 参考文献 | 第103-110页 |
| 致谢 | 第110-111页 |
| 作者简历 | 第111页 |
