| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 缩略语 | 第7-11页 |
| 第一章 引言 | 第11-27页 |
| ·Elongator 复合物及Elp3 的功能 | 第11-16页 |
| ·Elongator 复合物 | 第11-14页 |
| ·ELP3 的功能 | 第14-16页 |
| ·CTK1 的功能研究 | 第16-18页 |
| ·酵母双杂交系统 | 第18-22页 |
| ·酵母双杂交系统的建立 | 第18-19页 |
| ·酵母双杂交系统的原理及组成 | 第19-20页 |
| ·酵母双杂交系统的应用 | 第20-21页 |
| ·酵母双杂交系统特点 | 第21-22页 |
| ·酵母双杂交系统的拓展 | 第22页 |
| ·GST Pull-down 技术 | 第22-23页 |
| ·其他研究蛋白质相互作用的方法 | 第23-26页 |
| ·免疫共沉淀技术 | 第23-24页 |
| ·串联亲和纯化技术 | 第24-26页 |
| ·IPTG 诱导蛋白表达的原理 | 第26-27页 |
| 第二章 材料与方法 | 第27-50页 |
| ·试验材料 | 第27页 |
| ·主要试剂及常用溶液配方 | 第27-32页 |
| ·主要实验仪器 | 第32-33页 |
| ·实验方法 | 第33-50页 |
| ·基因的扩增 | 第33页 |
| ·PCR 产物的检测 | 第33-34页 |
| ·PCR 产物的纯化 | 第34页 |
| ·真核穿梭载体的构建 | 第34-39页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第39-43页 |
| ·“诱饵”和“猎物”融合质粒的自激活测定 | 第43-44页 |
| ·诱饵蛋白有无渗漏的检测 | 第44页 |
| ·诱饵蛋白在酵母中的毒性作用检测 | 第44-45页 |
| ·酵母双杂交验证蛋白间的相互作用 | 第45页 |
| ·原核表达载体转化入BL21（DE3） | 第45页 |
| ·蛋白的诱导表达 | 第45-46页 |
| ·SDS-PAGE 分析表达产物 | 第46页 |
| ·检测“诱饵”和“猎物”是否是可溶性蛋白 | 第46页 |
| ·pull down 验证hELP3 与CTK1，hELP4，yELP4 的互作关系 | 第46-48页 |
| ·SDS-PAGE 和western-blot 检测pull down 结果 | 第48-50页 |
| 第三章 实验结果与分析 | 第50-65页 |
| ·hELP3 与CTK1、yELP4、hELP4 相互作用的酵母双杂交分析 | 第50-56页 |
| ·AD、BD 融合质粒的构建 | 第50-53页 |
| ·BD 融合质粒有无渗漏表达的检测及 AD、BD 融合质粒的自激活检测 | 第53-55页 |
| ·诱饵质粒的毒性作用检测 | 第55页 |
| ·AD 融合蛋白与BD 融合蛋白间相互作用的双杂交检测 | 第55-56页 |
| ·GST 融合的hELP3 与CTK1、hELP4、yELP4 相互作用的GST pull down 验证 | 第56-65页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第56-58页 |
| ·诱饵和猎物蛋白的诱导与SDS-PAGE 检测 | 第58-60页 |
| ·诱饵、猎物蛋白的可溶性检测 | 第60-62页 |
| ·hElp3 与CTK1、hElp4、yElp4 间相互作用的pull down 验证 | 第62-65页 |
| 第四章 讨论 | 第65-71页 |
| ·实验技术的改进与实验条件的优化 | 第65-68页 |
| ·酵母双杂交假阳性的控制 | 第65-66页 |
| ·原核表达系统的选择 | 第66页 |
| ·融合蛋白的诱导表达条件的优化 | 第66-67页 |
| ·Pull down 验证蛋白互作与问题解决 | 第67-68页 |
| ·对于本文所得结果的综合分析讨论 | 第68-71页 |
| 结论 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第77-78页 |
