产耐热α-葡萄糖苷酶重组大肠杆菌的构建及发酵条件优化研究
| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-10页 |
| 1 绪论 | 第10-22页 |
| ·引言 | 第10页 |
| ·α-葡萄糖苷酶的理化性质 | 第10-11页 |
| ·α-葡萄糖苷酶的来源 | 第11页 |
| ·α-葡萄糖苷酶在细胞中的分布 | 第11-12页 |
| ·α-葡萄糖苷酶的应用 | 第12-17页 |
| ·α-葡萄糖苷酶的生物学功能 | 第12页 |
| ·低聚异麦芽糖 | 第12-16页 |
| ·α-葡萄糖苷酶在啤酒酿造中的应用 | 第16页 |
| ·α-葡萄糖苷酶的其它应用 | 第16-17页 |
| ·α-葡萄糖苷酶的研究现状 | 第17页 |
| ·耐热酶的特性 | 第17-18页 |
| ·α-葡萄糖苷酶的的克隆与表达 | 第18-19页 |
| ·大肠杆菌表达系统 | 第18-19页 |
| ·质粒表达载体 | 第19页 |
| ·表达宿主菌 | 第19页 |
| ·α-葡萄糖苷酶检测方法 | 第19-20页 |
| ·研究目的和意义 | 第20-21页 |
| ·主要研究内容 | 第21-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-34页 |
| ·材料 | 第22-25页 |
| ·菌种 | 第22页 |
| ·载体 | 第22页 |
| ·试剂 | 第22-23页 |
| ·主要仪器 | 第23-24页 |
| ·主要溶剂及其配制 | 第24页 |
| ·培养基 | 第24页 |
| ·培养方法 | 第24-25页 |
| ·实验方法 | 第25-34页 |
| ·PCR 引物设计 | 第25页 |
| ·PCR 扩增α-糖苷酶基因 | 第25-26页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳和片段回收 | 第26-27页 |
| ·pET28α(+)质粒的提取 | 第27页 |
| ·质粒与目的基因用限制性内切酶双酶切 | 第27-28页 |
| ·连接反应 | 第28页 |
| ·α-糖苷酶基因的表达基因的诱导表达 | 第28-29页 |
| ·酶活测定 | 第29-31页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分析 | 第31-34页 |
| 3 重组大肠杆菌的构建 | 第34-48页 |
| ·引言 | 第34页 |
| ·PCR 扩增α-糖苷酶基因 | 第34-35页 |
| ·双酶切 | 第35-36页 |
| ·酶切回收 | 第36-37页 |
| ·菌落总DNA 提取电泳 | 第37-38页 |
| ·重组质粒提取 | 第38-39页 |
| ·Hind Ⅲ单酶切 | 第39-40页 |
| ·酶活检测 | 第40-41页 |
| ·SDS-PAGE 电泳分析 | 第41-42页 |
| ·α-葡萄糖苷酶基因序列分析 | 第42-44页 |
| ·α-葡萄糖苷酶酶学性质的研究 | 第44-46页 |
| ·α-葡萄糖苷酶的最适pH | 第44页 |
| ·α-葡萄糖苷酶的pH 稳定性 | 第44-45页 |
| ·α-葡萄糖苷酶的最适温度 | 第45页 |
| ·α-葡萄糖苷酶的热稳定性 | 第45-46页 |
| ·本章小结 | 第46-48页 |
| 4 重组菌产酶条件的的研究 | 第48-54页 |
| ·引言 | 第48页 |
| ·碳源种类对α-葡萄糖苷酶合成的影响 | 第48-49页 |
| ·接种量对α-葡萄糖苷酶合成的影响 | 第49页 |
| ·金属离子对α-葡萄糖苷酶合成的影响 | 第49-50页 |
| ·IPTG 添加时间对α-葡萄糖苷酶合成的影响 | 第50-51页 |
| ·诱导时间对α-葡萄糖苷酶合成的影响 | 第51页 |
| ·重组菌产酶条件的正交设计 | 第51-53页 |
| ·本章小结 | 第53-54页 |
| 5 结论与展望 | 第54-56页 |
| ·结论 | 第54-55页 |
| ·展望 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第60-62页 |
