| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 缩略词 | 第9-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-17页 |
| 1 RISC 复合物的研究现状 | 第12-13页 |
| ·RISC 复合物 | 第12页 |
| ·Dicer 酶 | 第12页 |
| ·AGO 蛋白家族 | 第12-13页 |
| 2 小 RNA 的研究进展 | 第13-16页 |
| ·miRNA | 第14页 |
| ·siRNA | 第14-15页 |
| ·piRNA | 第15页 |
| ·tRFs（tRNA-derived fragments） | 第15页 |
| ·其他小 RNA | 第15-16页 |
| 3 展望 | 第16-17页 |
| 第二章 实验设计方案 | 第17-19页 |
| 1 实验目的和意义 | 第17页 |
| 2 实验内容 | 第17-18页 |
| 3 实验流程图 | 第18-19页 |
| 第三章 ie1-bacmid 表达系统的构建 | 第19-31页 |
| 1 材料与试剂及仪器设备 | 第19页 |
| 2 方法 | 第19-27页 |
| ·重组载体 pIEx-1-BmAGO2 的构建 | 第19-22页 |
| ·重组载体 pFastBacHTb-pIEx-1-EGFP/BmAGO2 的构建 | 第22-25页 |
| ·重组表达病毒载体 ie1-bacmid-EGFP/BmAGO2 的构建 | 第25-27页 |
| 3 结果 | 第27-30页 |
| ·重组病毒载体 ie1-bacmid-EGFP/BmAGO2 构建流程图 | 第27页 |
| ·重组载体 pIEx-1-BmAGO2 的鉴定 | 第27-28页 |
| ·重组转移载体 pFastBacHTb-pIEx-1-EGFP/BmAGO2 的鉴定 | 第28-29页 |
| ·重组病毒基因组 ie1-bacmid-EGFP/BmAGO2 的 PCR 鉴定 | 第29-30页 |
| 4 讨论 | 第30-31页 |
| 第四章 EGFP 和 BmAGO2 蛋白在 ie1-bacmid 表达系统中的表达分析 | 第31-43页 |
| 1 材料与试剂及设备仪器 | 第31-33页 |
| 2 方法 | 第33-36页 |
| ·家蚕 BmN 细胞的培养、冻存与复苏 | 第33-34页 |
| ·转染试剂介导的 ie1-bacmid-EGFP/BmAGO2 基因组 DNA 的转染 | 第34-35页 |
| ·病毒的培养 | 第35页 |
| ·病毒滴度测定(终点稀释法) | 第35页 |
| ·Bradford 法测定蛋白浓度 | 第35-36页 |
| ·Western blotting 检测 EGFP 和 BmAGO2 在家蚕 BmN 细胞中的表达 | 第36页 |
| ·MTT 检测细胞活力 | 第36页 |
| 3 结果 | 第36-42页 |
| ·病毒滴度测定（终点稀释法） | 第36-38页 |
| ·融合蛋白在家蚕 BmN 细胞中的表达及 Western blotting 鉴定 | 第38-40页 |
| ·Western blotting 鉴定蛋白的时序表达及细胞活力 | 第40-42页 |
| 4 讨论 | 第42-43页 |
| 第五章 免疫共沉淀分离 RISC 复合物及结合 RNA | 第43-49页 |
| 1 材料与试剂及设备仪器 | 第43-44页 |
| 2 方法 | 第44-46页 |
| ·家蚕细胞中重组 HIS 融合 BmAGO2 蛋白的免疫共沉淀 | 第44-45页 |
| ·Western blotting 检测免疫共沉淀分离出的 BmAGO2 蛋白 | 第45页 |
| ·免疫共沉淀分离 BmAGO2 蛋白及结合 RNA | 第45页 |
| ·免疫共沉淀结合 RNA 的提取 | 第45-46页 |
| ·15%尿素变性聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定提取的 RNA | 第46页 |
| 3 结果 | 第46-48页 |
| ·免疫共沉淀分离 BmAGO2 蛋白 | 第46-47页 |
| ·BmAGO2 蛋白结合 RNA 的分离 | 第47-48页 |
| 4 讨论 | 第48-49页 |
| 第六章 家蚕细胞 RISC 复合物结合小 RNA 的高通量测序及生物信息学分析 | 第49-61页 |
| 1 材料与方法 | 第49-51页 |
| ·深度测序数据来源 | 第49页 |
| ·测序数据的分析 | 第49-51页 |
| ·Stem-loop qRT-PCR 法检测细胞中 miRNA 的表达水平 | 第51页 |
| 2 结果与分析 | 第51-60页 |
| ·小 RNA 序列的基本情况 | 第51-54页 |
| ·BmAGO2 蛋白相关 miRNA | 第54-57页 |
| ·BmNPV 编码的 small RNAs 和 miRNAs | 第57-59页 |
| ·来源于 rRNAs, snoRNAs 和 snRNAs 的新小 RNA | 第59-60页 |
| 3 讨论 | 第60-61页 |
| 第七章 家蚕细胞 tRF 小 RNA 的 Northern blotting 鉴定与剪切模式的分析 | 第61-72页 |
| 1 材料与试剂及仪器 | 第61-65页 |
| 2 方法 | 第65-67页 |
| ·细胞的收集和细胞总 RNA 的提取 | 第65页 |
| ·RNA 浓度及纯度测定 | 第65页 |
| ·探针的制备与纯化 | 第65-66页 |
| ·Northern blotting 鉴定 | 第66-67页 |
| 3 结果与分析 | 第67-71页 |
| ·tRFs 的 Northern blotting 鉴定 | 第67-69页 |
| ·tRFs 的剪切分析 | 第69-71页 |
| 4 讨论 | 第71-72页 |
| 结论 | 第72-73页 |
| 附录 | 第73-84页 |
| 参考文献 | 第84-89页 |
| 致谢 | 第89页 |
