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过氧化氢胁迫下耐辐射奇球菌中FMN riboswitch的功能研究

摘要第1-9页
Abstract第9-14页
第一章 绪论第14-27页
   ·耐辐射奇球菌第14-20页
     ·耐辐射奇球菌概况第14页
     ·耐辐射奇球菌的基本特性第14-15页
     ·耐辐射奇球菌的抗氧化保护机制第15-20页
       ·超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、过氧化物酶第16-17页
       ·类胡萝卜素第17-18页
       ·Mn~(2+)复合物第18-19页
       ·蛋白调控第19-20页
   ·黄素单核苷酸核糖开关(FMN riboswitch)第20-26页
     ·黄素单核苷酸核糖开关的结构特征第20-21页
     ·黄素单核苷酸核糖开关的作用机制第21-22页
     ·黄素单核苷酸核糖开关的研究进展第22-26页
       ·FMN riboswitch 的三维结构第22-23页
       ·基因表达调控研究第23-24页
       ·调节过程中的热力学和动力学研究第24-25页
       ·药物筛选和疾病治疗第25-26页
   ·小结第26-27页
第二章 实验方案设计第27-29页
 1 实验目的和意义第27-28页
 2 研究内容第28页
 3 实验流程图第28-29页
第三章 耐辐射奇球菌FMN riboswitch的生物信息学分析第29-35页
   ·材料与方法第29-30页
     ·数据来源第29页
     ·研究方法第29-30页
   ·结果和分析第30-33页
     ·FMN riboswitch 在 DR 基因组中的位置和基本特性第30页
     ·FMN riboswitch 同源性保守序列分析第30-31页
     ·FMN riboswitch 序列同源性的建树分析第31-32页
     ·耐辐射奇球菌中 FMN riboswitch 的二级结构第32-33页
     ·耐辐射奇球菌中 FMN riboswitch 的靶基因预测与初步筛选第33页
   ·讨论第33-35页
第四章 氧化胁迫下D. radiodurans中FMN riboswitch的表达第35-43页
   ·材料与方法第35-39页
     ·实验菌株与培养条件第35页
     ·主要试剂和仪器第35页
     ·引物第35页
     ·耐辐射奇球菌培养与氧化处理第35-36页
     ·从 DR 菌中提取总 RNA第36-37页
     ·DNaseI 处理总 RNA第37页
     ·逆转录反应第37-38页
     ·PCR 反应第38页
     ·荧光定量 PCR 反应检测 FMN riboswitch 表达差异第38-39页
   ·结果与分析第39-42页
     ·Total RNA 提取结果第39-40页
     ·各基因 RT-PCR 结果第40-41页
     ·荧光定量QPCR检测 FMN riboswitch 表达差异分析第41-42页
   ·讨论第42-43页
第五章 耐辐射奇球菌FMN riboswitch缺失突变株的构建第43-55页
   ·材料与方法第43-49页
     ·实验菌株、重组质粒和培养条件第43页
     ·主要试剂和仪器第43-44页
     ·耐辐射奇球菌 FMN riboswitch 缺失突变株的构建第44页
     ·引物信息第44-45页
     ·DR 菌基因组 DNA 的提取第45页
     ·琼脂糖凝胶电泳第45-46页
     ·质粒的提取第46页
     ·PCR 法获取目的片段第46-47页
     ·DNA 片段的纯化回收第47-48页
     ·重叠延伸 PCR 获取连接片段第48页
     ·耐辐射球菌的感受态细胞制备与转化第48-49页
     ·DR 的转化与突变株的筛选第49页
     ·耐辐射奇球菌 FMN riboswitch 突变株的鉴定第49页
   ·结果与分析第49-54页
     ·耐辐射奇球菌的基因组 DNA第49-50页
     ·质粒 DNA第50页
     ·PCR 目的片段第50-52页
     ·重叠延伸 PCR 连接片段第52-53页
     ·突变子的筛选第53页
     ·耐辐射奇球菌 FMN riboswitch 突变株的鉴定和构建第53-54页
   ·讨论第54-55页
第六章 耐辐射奇球菌FMN riboswitch突变株的特性分析第55-59页
   ·材料与方法第55-56页
     ·菌株、材料和试剂第55页
     ·仪器和设备第55页
     ·生长曲线测定第55页
     ·菌株 H2O2抗性生存曲线测定第55-56页
   ·结果与分析第56-57页
     ·耐辐射奇球菌 FMN riboswitch 缺失突变株比较野生菌株 R1 的生长出现了延滞第56页
     ·耐辐射奇球菌 FMN riboswitch 缺失突变株对 H2O2表现更为敏感第56-57页
   ·讨论第57-59页
结论第59-61页
参考文献第61-67页
致谢第67页

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