| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-6页 |
| 目录 | 第6-9页 |
| 符号说明 | 第9-10页 |
| 上篇 文献综述 | 第10-20页 |
| 第一章 细菌Ⅵ型分泌系统(T6SS)研究进展 | 第10-17页 |
| ·T6SS基因的发现过程 | 第10-11页 |
| ·T6SS基因 | 第11-13页 |
| ·T6SS蛋白组成 | 第13-16页 |
| ·T6SS装置的模型及其工作原理 | 第16页 |
| ·对T6SS研究的展望 | 第16-17页 |
| 参考文献 | 第17-20页 |
| 下篇 试验研究 | 第20-48页 |
| 第二章 大肠杆菌F18ab菌株hcp基因缺失株的构建 | 第20-32页 |
| 摘要 | 第20页 |
| Abstract | 第20-22页 |
| ·材料 | 第22-23页 |
| ·菌株、质粒 | 第22-23页 |
| ·主要试剂 | 第23页 |
| ·主要仪器 | 第23页 |
| ·方法 | 第23-28页 |
| ·hcp基因缺失突变鉴定引物的设计 | 第23页 |
| ·检测E coli.F18ab菌株的hcp基因 | 第23-24页 |
| ·PCR模板的制备 | 第23-24页 |
| ·PCR反应体系 | 第24页 |
| ·同源重组PCR引物的设计 | 第24页 |
| ·融合PCR产物的制备和纯化 | 第24-25页 |
| ·感受态细胞的制备及转化 | 第25-26页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第25页 |
| ·质粒pKD46的转化 | 第25页 |
| ·Red重组功能的诱导和感受态细胞的制备 | 第25-26页 |
| ·同源臂cat基因PCR产物电转化 | 第26页 |
| ·质粒pKD46的消除 | 第26页 |
| ·一次同源重组菌△hcp::Cat的PCR鉴定 | 第26-27页 |
| ·FLP位点专一性重组 | 第27页 |
| ·二次重组菌△hcp的鉴定 | 第27-28页 |
| ·结果 | 第28-29页 |
| ·野生株hcp基因的鉴定 | 第28页 |
| ·融合PCR产物的制备 | 第28页 |
| ·第一次同源重组菌△hcp：：Cat的PCR鉴定 | 第28-29页 |
| ·第二次重组菌△hcp的鉴定 | 第29页 |
| ·鉴定引物扩增△hcp菌株染色体上序列分析 | 第29页 |
| ·讨论 | 第29-30页 |
| 参考文献 | 第30-32页 |
| 第三章 F18ab大肠杆菌hcp基因对其毒力因子分泌的影响 | 第32-48页 |
| 摘要 | 第32页 |
| Abstract | 第32-33页 |
| ·材料 | 第33-34页 |
| ·菌株、质粒、细胞系 | 第33-34页 |
| ·实验动物 | 第34页 |
| ·主要试剂及配制 | 第34页 |
| ·仪器设备 | 第34页 |
| ·方法 | 第34-39页 |
| ·生长试验 | 第34页 |
| ·生化试验 | 第34页 |
| ·药敏试验 | 第34-35页 |
| ·生物膜形成试验 | 第35页 |
| ·互补试验 | 第35页 |
| ·运动试验 | 第35页 |
| ·IPEC-J2细胞粘附和侵袭试验 | 第35-36页 |
| ·IPEC-J2细胞的培养和传代 | 第35页 |
| ·IPEC-J2细胞粘附试验 | 第35-36页 |
| ·IPEC-J2细胞侵袭试验 | 第36页 |
| ·小鼠排毒带菌试验 | 第36页 |
| ·Vero细胞毒性试验 | 第36-37页 |
| ·Vero细胞的培养和传代 | 第36页 |
| ·Stx2e蛋白溶液的提取 | 第36-37页 |
| ·Vero细胞毒性试验 | 第37页 |
| ·Real Time PCR定量分析试验 | 第37-39页 |
| ·总RNA的提取 | 第37页 |
| ·基因组DNA的除去反应 | 第37-38页 |
| ·反转录反应 | 第38页 |
| ·Real Time PCR引物设计 | 第38页 |
| ·Real Time PCR反应 | 第38-39页 |
| ·结果 | 第39-43页 |
| ·生长试验、生化试验、药敏试验和生物膜形成试验 | 第39页 |
| ·互补试验 | 第39页 |
| ·运动试验 | 第39-40页 |
| ·IPCE-J2细胞粘附和侵袭试验 | 第40-41页 |
| ·IPEC-J2细胞粘附试验 | 第40-41页 |
| ·IPEC-J2细胞侵袭试验 | 第41页 |
| ·小鼠排毒带菌试验 | 第41-42页 |
| ·Vero细胞毒性试验 | 第42页 |
| ·Real Time PCR定量分析试验 | 第42-43页 |
| ·讨论 | 第43-46页 |
| ·运动试验 | 第44页 |
| ·IPEC-J2细胞粘附和侵袭试验 | 第44-45页 |
| ·小鼠排毒带菌试验 | 第45页 |
| ·Vero细胞毒性试验 | 第45-46页 |
| ·Real Time PCR反应试验 | 第46页 |
| 参考文献 | 第46-48页 |
| 全文小结 | 第48-50页 |
| 致谢 | 第50-51页 |