| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 目录 | 第6-9页 |
| 第一部分 前言 | 第9-24页 |
| 1 鸡传染性支气管炎病毒分子生物学研究进展 | 第9-15页 |
| ·病毒形态结构 | 第9-10页 |
| ·病毒粒子结构 | 第10-11页 |
| ·基因组结构 | 第11-12页 |
| ·结构蛋白及其生物学功能 | 第12-15页 |
| ·纤突蛋白(S) | 第13页 |
| ·囊膜蛋白(M) | 第13-14页 |
| ·核衣壳蛋白(N) | 第14页 |
| ·小囊膜蛋白(E) | 第14-15页 |
| 2 IB检测方法的研究进展 | 第15-17页 |
| ·血清学诊断方法 | 第15-16页 |
| ·琼扩试验(AGP) | 第15页 |
| ·酶联免疫吸附实验(ELISA) | 第15-16页 |
| ·中和试验(VN) | 第16页 |
| ·微量中和试验(MVN) | 第16页 |
| ·斑点免疫金测定法(DIGFA) | 第16页 |
| ·分子生物学检测技术 | 第16-17页 |
| ·RT-PCR | 第16-17页 |
| ·RT-PCR结合探针 | 第17页 |
| ·限制性酶切片段多态性分析(RFLP)分型 | 第17页 |
| 3 环介导等温扩增(LAMP)技术 | 第17-23页 |
| ·LAMP法的引物设计 | 第18页 |
| ·LAMP法的基本原理 | 第18-21页 |
| ·LAMP法的特点 | 第21-22页 |
| ·LAMP法的反应体系 | 第22页 |
| ·LAMP法在动物病毒病检测中的应用 | 第22-23页 |
| ·禽流感病毒(AIV)的检测 | 第22页 |
| ·口蹄疫病毒(FMDV)的检测 | 第22-23页 |
| ·猪水疱病病毒(SVDV)的检测 | 第23页 |
| 4 研究的目的和意义 | 第23-24页 |
| 第二部分 试验研究 | 第24-50页 |
| 第一章 鸡传染性支气管炎病毒RT-PCR检测方法的建立 | 第24-38页 |
| 1 材料 | 第24-25页 |
| ·仪器与设备 | 第24页 |
| ·试剂 | 第24-25页 |
| ·菌种、毒株 | 第25页 |
| ·检测样品 | 第25页 |
| 2 方法 | 第25-32页 |
| ·引物的设计 | 第25页 |
| ·IBV总RNA的提取 | 第25-26页 |
| ·IBV目的M基因片段的克隆 | 第26-29页 |
| ·cDNA的合成(RT) | 第26页 |
| ·目的M基因片段PCR扩增 | 第26-27页 |
| ·纯化回收 | 第27-28页 |
| ·DH5α感受态的制备 | 第28-29页 |
| ·IBV目的M基因片段的鉴定 | 第29-30页 |
| ·质粒的提取 | 第29-30页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第30页 |
| ·RT-PCR反应条件的确定 | 第30页 |
| ·敏感性试验 | 第30-31页 |
| ·特异性试验 | 第31页 |
| ·DNA的提取 | 第31页 |
| ·RNA的提取与反转录 | 第31页 |
| ·PCR扩增 | 第31页 |
| ·检测应用 | 第31-32页 |
| 3 结果与分析 | 第32-36页 |
| ·IBV目的M基因片段扩增结果 | 第32页 |
| ·IBV目的M基因片段的鉴定 | 第32-34页 |
| ·反应条件的优化 | 第34-35页 |
| ·IBV RT-PCR敏感性试验结果 | 第35页 |
| ·IBV RT-PCR特异性试验结果 | 第35-36页 |
| ·IBV RT-PCR应用检测结果 | 第36页 |
| 4 讨论 | 第36-38页 |
| 第二章 IBV RT-LAMP检测方法的初步研究 | 第38-50页 |
| 1 材料 | 第38-40页 |
| ·仪器与设备 | 第38-39页 |
| ·试剂 | 第39页 |
| ·菌种、毒株 | 第39-40页 |
| 2 方法 | 第40-43页 |
| ·引物设计 | 第40页 |
| ·模板的制备 | 第40-41页 |
| ·IBV总RNA的提取 | 第40页 |
| ·cDNA制备(RT) | 第40页 |
| ·重组质粒IBV-pMD19-T的提取 | 第40-41页 |
| ·基础RT-LAMP反应 | 第41-42页 |
| ·反应体系(25μL) | 第41-42页 |
| ·结果读判 | 第42页 |
| ·IBV RT-LAMP扩增产物鉴定 | 第42页 |
| ·RT-LAMP反应条件的确定 | 第42页 |
| ·RT-LAMP敏感性试验 | 第42-43页 |
| ·RT-LAMP特异性试验 | 第43页 |
| ·基因模板的制备 | 第43页 |
| ·LAMP扩增 | 第43页 |
| 3 结果与分析 | 第43-49页 |
| ·引物设计 | 第43-44页 |
| ·IBV基础RT-LAMP扩增结果 | 第44-45页 |
| ·IBV RT-LAMP扩增产物的酶切鉴定 | 第45页 |
| ·IBV RT-LAMP反应条件的优化 | 第45-47页 |
| ·IBV RT-LAMP敏感性试验结果 | 第47页 |
| ·IBV RT-LAMP特异性试验结果 | 第47-49页 |
| 4 讨论 | 第49-50页 |
| 第三部分 结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-56页 |
| 致谢 | 第56页 |