| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-14页 |
| 第一部分 综述 | 第14-24页 |
| ·果胶及果胶物质 | 第14-20页 |
| ·果胶的结构 | 第14-15页 |
| ·果胶酶的分类 | 第15-16页 |
| ·果胶酶的酶学性质 | 第16-18页 |
| ·碱性果胶酶在生物脱胶中的应用及意义 | 第18-20页 |
| ·毕赤酵母表达系统 | 第20-23页 |
| ·毕赤酵母表达系统的研究进展 | 第20-21页 |
| ·相关表达载体 | 第21-22页 |
| ·获得高拷贝数整合转化子的方法 | 第22页 |
| ·毕赤酵母表达外源基因的优点 | 第22页 |
| ·温度对毕赤酵母表达的影响 | 第22-23页 |
| ·密码子的优化 | 第23页 |
| ·本实验前期工作 | 第23页 |
| ·实验目的 | 第23-24页 |
| 第二部分 材料与方法 | 第24-36页 |
| ·实验材料和仪器设备 | 第24-27页 |
| ·实验菌株 | 第24页 |
| ·培养基 | 第24-25页 |
| ·质粒 | 第25页 |
| ·引物 | 第25-26页 |
| ·酶和试剂 | 第26页 |
| ·仪器和设备 | 第26页 |
| ·主要缓冲液 | 第26-27页 |
| ·方法 | 第27-36页 |
| ·细菌总DNA的抽提 | 第27页 |
| ·目的基因的获得 | 第27-28页 |
| ·载体的构建 | 第28页 |
| ·毕赤酵母感受态细胞的制备及转化 | 第28页 |
| ·果胶酶基因在毕赤酵母中的诱导表达 | 第28-29页 |
| ·果胶酶的纯化 | 第29页 |
| ·SDS-PAGE检测表达蛋白 | 第29页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第29-30页 |
| ·酶的去糖基化 | 第30页 |
| ·酶解液中还原性糖的测定蛋白浓度的测定 | 第30页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第30-31页 |
| ·酶学性质的测定 | 第31-32页 |
| ·酶动力学常数Km、Vmax的测定 | 第32-33页 |
| ·果胶酶密码子的优化 | 第33页 |
| ·相同拷贝数转化子的获得及优化前后酶活力比较 | 第33页 |
| ·功能性筛选高拷贝转化子 | 第33-34页 |
| ·R-T PCR确定拷贝数 | 第34页 |
| ·果胶酶发酵参数的优化 | 第34页 |
| ·果胶酶对苎麻脱胶和织物煮练的应用 | 第34-35页 |
| ·果胶酶对苎麻脱胶条件的优化 | 第35-36页 |
| 第三部分 结果与分析 | 第36-50页 |
| ·果胶酶pel168基因的获得与分析 | 第36页 |
| ·毕赤酵母表达载体pHBM905A的构建 | 第36-37页 |
| ·SDS-PAGE检测 | 第37页 |
| ·重组果胶酶PEL168P的去糖基化处理 | 第37-38页 |
| ·pel168基因在大肠杆菌BL21(DE3)中的表达 | 第38-39页 |
| ·果胶酶最适温度和热稳定性的测定 | 第39-40页 |
| ·果胶酶最适pH值和pH稳定性的测定 | 第40-41页 |
| ·金属离子和有机溶剂对果胶酶PEL168P的影响 | 第41-42页 |
| ·培养温度对果胶酶PEL168P发酵的影响 | 第42-43页 |
| ·果胶酶PEL168P动力学参数的测定 | 第43页 |
| ·优化后pel168s基因的合成与分析 | 第43-45页 |
| ·优化后对果胶酶酶活力的影响 | 第45页 |
| ·高拷贝的筛选 | 第45-46页 |
| ·R-T PCR测定毕赤酵母基因组中外源基因的拷贝数 | 第46-47页 |
| ·不同浓度Ca~(2+)对果胶酶发酵的影响 | 第47页 |
| ·果胶酶在生物脱胶上的应用 | 第47-49页 |
| ·果胶酶对苎麻脱胶条件的优化 | 第49-50页 |
| 第四部分 讨论与展望 | 第50-52页 |
| 参考文献 | 第52-57页 |
| 致谢 | 第57页 |