| 摘要 | 第1-3页 |
| Abstract | 第3-6页 |
| 引言 | 第6-8页 |
| 第一章 材料与方法 | 第8-17页 |
| ·实验材料 | 第8页 |
| ·菌株、质粒和培养条件 | 第8页 |
| ·主要试剂 | 第8页 |
| ·方法 | 第8-17页 |
| ·松材线虫的来源 | 第8页 |
| ·无菌松材线虫的获得 | 第8-9页 |
| ·松材线虫cDNA文库的构建 | 第9页 |
| ·序列测定及分析 | 第9页 |
| ·松材线虫纤维素酶基因的克隆 | 第9-13页 |
| ·引物设计 | 第9页 |
| ·PCR | 第9-10页 |
| ·目的片段回收 | 第10-11页 |
| ·PCR片段与pMD18-T载体连接 | 第11页 |
| ·将含目的基因的连接载体(pMD18-T-BXC)转化到大肠杆菌体内 | 第11-12页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第12页 |
| ·菌落PCR鉴定 | 第12-13页 |
| ·测序鉴定 | 第13页 |
| ·松材线虫纤维素酶的DNA序列分析 | 第13-14页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第13页 |
| ·菌落PCR鉴定 | 第13页 |
| ·工程菌的构建及目的基因测序 | 第13-14页 |
| ·含松材线虫纤维素酶基因原核表达载体的构建 | 第14页 |
| ·重组纤维素酶的诱导表达 | 第14页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第14-15页 |
| ·重组蛋白的初步纯化—亲和层析 | 第14-15页 |
| ·透析 | 第15页 |
| ·阴离子(DEAE)交换层析 | 第15页 |
| ·酶学活性测定 | 第15-17页 |
| ·葡萄糖标准曲线绘制 | 第15-16页 |
| ·松材线虫纤维素酶的活性分析 | 第16页 |
| ·松材线虫纤维素酶最适温度的测定 | 第16页 |
| ·松材线虫纤维素酶最适pH的测定 | 第16页 |
| ·酶反应的热稳定性 | 第16页 |
| ·酶反应的pH稳定性 | 第16-17页 |
| 第二章 实验结果 | 第17-30页 |
| ·松材线虫纤维素基因的PCR扩增 | 第17-23页 |
| ·松材线虫纤维素酶基因的克隆 | 第17页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第17-18页 |
| ·菌落PCR鉴定 | 第18-19页 |
| ·松材线虫纤维素酶基因cDNA编码区的序列分析 | 第19-21页 |
| ·以松材线虫基因组为模板的PCR结果 | 第21-22页 |
| ·重组质粒pMD18-T-BXC46’酶切鉴定结果 | 第22-23页 |
| ·纤维素酶基因(BXC46’)的DNA序列测定结果 | 第23页 |
| ·含松材线虫纤维素酶基因原核表达载体的构建 | 第23-24页 |
| ·重组纤维素酶的表达与部分纯化 | 第24-25页 |
| ·重组纤维素酶的纯化 | 第25-27页 |
| ·亲和层析结果 | 第25-26页 |
| ·阴离子交换层析结果 | 第26-27页 |
| ·松材线虫纤维素酶酶学活性 | 第27-30页 |
| ·葡萄糖标准曲线绘制 | 第27-28页 |
| ·松材线虫纤维素酶的最适温度及最适pH | 第28页 |
| ·松材线虫纤维素酶的热稳定性及pH稳定性 | 第28-30页 |
| 结论 | 第30-31页 |
| 讨论 | 第31-32页 |
| 参考文献 | 第32-35页 |
| 综述 | 第35-50页 |
| 综述参考文献 | 第46-50页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第50-51页 |
| 附录 | 第51-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
