| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 第一章 绪论 | 第9-17页 |
| ·燃料酒精概述 | 第9-10页 |
| ·燃料酒精简介 | 第9页 |
| ·燃料酒精发展的意义 | 第9页 |
| ·燃料酒精发展的状况 | 第9-10页 |
| ·甘油代谢工程与酒精发酵 | 第10-15页 |
| ·甘油代谢工程概述 | 第10-11页 |
| ·甘油代谢改造的研究现状 | 第11-12页 |
| ·甘油代谢与辅酶代谢概述 | 第12-13页 |
| ·辅酶代谢途径改造的研究现状 | 第13-15页 |
| ·课题研究意义 | 第15页 |
| ·课题研究内容 | 第15-17页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第17-27页 |
| ·实验材料 | 第17-19页 |
| ·菌株与质粒 | 第17页 |
| ·引物 | 第17-18页 |
| ·培养基和培养条件 | 第18页 |
| ·工具酶和主要试剂 | 第18-19页 |
| ·酵母染色体提取试剂 | 第19页 |
| ·主要仪器与设备 | 第19页 |
| ·实验方法 | 第19-27页 |
| ·蜡状芽孢杆菌（大肠杆菌）染色体 DNA 的提取 | 第19-20页 |
| ·工业酒精酵母染色体 DNA 的提取 | 第20页 |
| ·大肠杆菌 JM109 感受态的制备 | 第20-21页 |
| ·大肠杆菌 JM109 感受态的转化 | 第21页 |
| ·常规分子生物学操作 | 第21页 |
| ·目的基因的 PCR 扩增 | 第21-22页 |
| ·整合表达载体 pMGKR-GCY1-DAK1 的构建 | 第22页 |
| ·游离表达载体 pYX212-gapN-kan、pYX212-POS5-kan、pYX212-mhpF-kan 和pYX212-frdA-kan 的构建 | 第22页 |
| ·工业酒精酵母电穿孔转化法 | 第22-23页 |
| ·重组菌 S.cerevisiae GDS1(P_(PGK)-GCY1-DAK1-kan)的构建 | 第23页 |
| ·重组菌 S.cerevisiae GAS1(PTP1-gapN-kan)、S.cerevisiaePOS1(PTP1-POS5-kan)、S.cerevisiae MHS1(PTP1-mhpF-kan)和 S.cerevisiaeFRS1(PTP1-frdA-kan)的构建 | 第23页 |
| ·重组菌 S.cerevisiae GDS1 抗性基因的敲除 | 第23-24页 |
| ·重组菌 S.cerevisiae GDMS1 的构建 | 第24页 |
| ·细胞裂解液的制备 | 第24页 |
| ·甘油脱氢酶和二羟基丙酮激酶酶活的测定 | 第24页 |
| ·NADP~+依赖型的 3-磷酸甘油醛脱氢酶酶活的测定 | 第24页 |
| ·NAD~+依赖型乙醛脱氢酶酶活的测定 | 第24页 |
| ·NAD~+依赖型富马酸还原酶酶活的测定 | 第24-25页 |
| ·NADH 激酶酶活的测定 | 第25页 |
| ·酒精发酵工艺 | 第25页 |
| ·重组菌生产曲线的测定 | 第25页 |
| ·辅酶 NADH 提取与测定 | 第25-26页 |
| ·发酵分析样品处理 | 第26页 |
| ·发酵产物的分析 | 第26-27页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第27-49页 |
| ·甘油分解的二羟丙酮途径在工业酒精酵母中的加强表达 | 第27-31页 |
| ·整合表达载体 pMGKR-GCY1-DAK1 的构建 | 第27-29页 |
| ·重组菌 S.cerevisiae GDS1(PPGK-GCY1-DAK1-kan)的鉴定 | 第29页 |
| ·重组甘油脱氢酶和二羟基丙酮激酶酶活的测定 | 第29页 |
| ·重组菌 S.cerevisiae GDS1(PPGK-GCY1-DAK1-kan)发酵性能的研究 | 第29-30页 |
| ·重组菌 S.cerevisiae GDS1(PPGK-GCY1-DAK1-kan)中辅酶 NADH 的测定 | 第30-31页 |
| ·辅酶 NADH 代谢途径在工业酒精酵母中的表达 | 第31-45页 |
| ·辅酶 NADH 代谢相关基因的选择 | 第31-32页 |
| ·表达载体 pYX212-gapN-kan、pYX212-POS5-kan、pYX212-mhpF-kan 和pYX212-frdA-kan 的构建 | 第32-36页 |
| ·重组菌 S.cerevisiae GAS1、POS1、MHS1 和 FRS1 的鉴定 | 第36-38页 |
| ·重组菌 S.cerevisiae GAS1、POS1、MHS1 和 FRS1 中重组酶活的测定 | 第38-40页 |
| ·重组菌 S.cerevisiae GAS1、POS1、MHS1 和 FRS1 发酵性能的比较 | 第40-44页 |
| ·重组菌 S.cerevisiae GAS1、POS1、MHS1 和 FRS1 胞内辅酶 NADH 的测定 | 第44-45页 |
| ·NAD~+依赖型的乙酰化的乙醛脱氢酶在重组菌 S.cerevisiae GDS1 中的表达 | 第45-49页 |
| ·重组菌 S.cerevisiae GDS1(::GCY1-DAK1-kan) G418 抗性的切除 | 第45-46页 |
| ·重组菌 S.cerevisiae GDMS1(::GCY1-DAK1-mhpF-kan)的鉴定 | 第46页 |
| ·重组菌 S.cerevisiae GDMS1(::GCY1-DAK1-mhpF-kan)发酵性能的研究 | 第46-48页 |
| ·重组菌 S.cerevisiae GDMS1 胞内辅酶 NADH 的测定 | 第48-49页 |
| 主要结论与展望 | 第49-51页 |
| 主要结论 | 第49-50页 |
| 展望 | 第50-51页 |
| 致谢 | 第51-53页 |
| 参考文献 | 第53-57页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第57页 |
