| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-30页 |
| ·木质纤维素的组成、结构及降解方式 | 第15-16页 |
| ·糖苷水解酶 | 第16-18页 |
| ·纤维素酶及半纤维素酶的研究进展 | 第18-23页 |
| ·纤维素酶 | 第18-20页 |
| ·半纤维素及其降解酶 | 第20-23页 |
| ·碳水化合物结合结构域(CBD或CBM)的研究进展 | 第23页 |
| ·木质素降解酶的研究进展 | 第23-24页 |
| ·纤维素酶及半纤维素酶的应用 | 第24-26页 |
| ·在饲料中的应用 | 第24页 |
| ·在食品工业中的应用 | 第24-25页 |
| ·在啤酒和葡萄酒酿造中的应用 | 第25页 |
| ·在纺织和洗涤行业中的应用 | 第25页 |
| ·在造纸和纸浆制造过程中的应用 | 第25页 |
| ·在农业和基础研究中的应用 | 第25-26页 |
| ·在生物能源方面的应用 | 第26页 |
| ·嗜热微生物来源的纤维素酶和半纤维素酶 | 第26-27页 |
| ·目前的研究趋势 | 第27-29页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第29-30页 |
| 第二章 云南锡矿酸性废水中木质纤维素降解菌的分离、鉴定及其产酶分析 | 第30-42页 |
| ·实验材料 | 第30-31页 |
| ·样品采集 | 第30页 |
| ·试剂和主要仪器 | 第30页 |
| ·引物合成和DNA测序 | 第30页 |
| ·培养基和溶液 | 第30-31页 |
| ·实验方法 | 第31-35页 |
| ·PDA平板划线筛选真菌 | 第31页 |
| ·真菌基因组的提取 | 第31页 |
| ·真菌的鉴定 | 第31-32页 |
| ·菌株G5产酶初步筛选 | 第32页 |
| ·不同碳源诱导下的产酶分析 | 第32-34页 |
| ·酶液的性质测定 | 第34页 |
| ·水解试验 | 第34-35页 |
| ·结果与分析 | 第35-40页 |
| ·酸性废水中真菌的分离和鉴定 | 第35-36页 |
| ·酶活标准曲线 | 第36页 |
| ·不同碳源对G5产纤维素酶的影响 | 第36-37页 |
| ·酶液性质测定(以Avicel为碳源) | 第37-39页 |
| ·水解试验 | 第39-40页 |
| ·讨论 | 第40-42页 |
| 第三章 Phialophora sp.G5来源的纤维素酶基因的克隆和表达 | 第42-85页 |
| 第一节 内切葡聚糖酶EgG5和EgGH45克隆表达和性质研究 | 第42-66页 |
| ·实验材料 | 第42-43页 |
| ·菌株、载体和内切葡聚糖酶基因egG5、egGH45 | 第42页 |
| ·引物合成和核酸测序 | 第42页 |
| ·试剂盒、酶和生化试剂 | 第42页 |
| ·主要仪器 | 第42页 |
| ·试剂 | 第42-43页 |
| ·培养基 | 第43页 |
| ·实验方法 | 第43-52页 |
| ·真菌来源的GH5和GH45内切葡聚糖酶基因的简并引物设计 | 第43-44页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第44页 |
| ·RNA的提取 | 第44-45页 |
| ·egG5和egGH45基因的克隆 | 第45-48页 |
| ·序列及结构分析 | 第48页 |
| ·EgG5缺失CBM和β-sheet突变 | 第48页 |
| ·表达载体的构建 | 第48-49页 |
| ·EgG5、EgG5-CBM、EgG5-Mut、EgGH45表达和纯化 | 第49-51页 |
| ·酶学性质分析 | 第51-52页 |
| ·EgG5和EgG5-CBM与微晶纤维素的结合实验 | 第52页 |
| ·EgG5及EgG5-Mut圆二色光谱分析其二级结构 | 第52页 |
| ·结果与分析 | 第52-63页 |
| ·EgG5和EgGH45序列及结构分析 | 第52-56页 |
| ·表达载体pPIC9-egG5及其突变体和pPIC9-egGH45的构建 | 第56页 |
| ·目标基因在毕赤酵母中的诱导表达及纯化 | 第56-57页 |
| ·内切葡聚糖酶的酶学性质分析 | 第57-63页 |
| ·讨论 | 第63-66页 |
| 第二节 Phialophora SP.G5的外切纤维素酶CBH6A的克隆、表达和性质研究 | 第66-77页 |
| ·实验材料 | 第66页 |
| ·菌株、载体和外切葡聚糖酶基因 | 第66页 |
| ·引物合成和核酸测序 | 第66页 |
| ·试剂盒、工具酶和生化试剂 | 第66页 |
| ·主要仪器 | 第66页 |
| ·试剂 | 第66页 |
| ·培养基配制 | 第66页 |
| ·实验方法 | 第66-69页 |
| ·基因的获得 | 第66-68页 |
| ·序列及结构分析 | 第68页 |
| ·表达载体的构建 | 第68页 |
| ·pPIC9-cbh6A在毕赤酵母中的表达及纯化 | 第68页 |
| ·酶学性质分析 | 第68-69页 |
| ·结果与分析 | 第69-75页 |
| ·序列及三维结构分析 | 第69-70页 |
| ·表达载体的构建 | 第70页 |
| ·CBH6A在毕赤酵母中的表达及纯化 | 第70-71页 |
| ·重组CBH6A的酶学性质分析 | 第71-75页 |
| ·讨论 | 第75-77页 |
| 第三节 Phialophora SP. G5来源葡萄糖苷酶基因的表达和性质研究 | 第77-85页 |
| ·实验材料 | 第77页 |
| ·菌株、载体和葡萄糖苷酶基因 | 第77页 |
| ·引物合成和核酸测序 | 第77页 |
| ·试剂盒、工具酶和生化试剂 | 第77页 |
| ·主要仪器 | 第77页 |
| ·试剂 | 第77页 |
| ·培养基配制 | 第77页 |
| ·实验方法 | 第77-79页 |
| ·基因全长克隆 | 第77-78页 |
| ·葡萄糖苷酶的表达与纯化 | 第78-79页 |
| ·BglGH1的酶学性质分析 | 第79页 |
| ·结果与分析 | 第79-84页 |
| ·序列和结构分析 | 第79-81页 |
| ·酵母表达载体pPIC9-bglGH1的构建 | 第81页 |
| ·重组表达载体在毕赤酵母中的表达及纯化 | 第81-82页 |
| ·葡萄糖苷酶BglGH1的酶学性质分析 | 第82-84页 |
| ·讨论 | 第84-85页 |
| 第四章 GH7β-1,4-葡聚糖酶BglG5的纯化和基因克隆 | 第85-99页 |
| ·实验材料 | 第85页 |
| ·菌株、载体 | 第85页 |
| ·引物合成和核酸序列测定 | 第85页 |
| ·试剂盒、工具酶和生化试剂 | 第85页 |
| ·主要仪器 | 第85页 |
| ·试剂 | 第85页 |
| ·培养基配制 | 第85页 |
| ·实验方法 | 第85-89页 |
| ·β-1,4-葡聚糖酶BglG5的纯化 | 第85-86页 |
| ·纯化蛋白的鉴定 | 第86页 |
| ·纯化蛋白性质测定 | 第86页 |
| ·模拟胃液下纯化酶的稳定性和对大麦-豆粕型饲料粘度影响 | 第86-87页 |
| ·纯化酶对大麦麦芽汁粘度的影响 | 第87页 |
| ·产物分析 | 第87页 |
| ·纯化酶基因全长的获得 | 第87-89页 |
| ·结果与分析 | 第89-97页 |
| ·β-1,4-葡聚糖酶BglG5的纯化 | 第89-91页 |
| ·质谱鉴定结果 | 第91页 |
| ·纯化酶的性质测定 | 第91-93页 |
| ·底物特异性和动力学分析及和其他酶的比较 | 第93-94页 |
| ·纯化酶在SGF中的稳定性 | 第94页 |
| ·水解产物分析 | 第94页 |
| ·纯化酶BglG5对大麦-豆粕型饲料粘度的影响 | 第94页 |
| ·纯化酶对麦芽汁过滤速率和粘度的影响 | 第94页 |
| ·纯化酶基因克隆 | 第94-97页 |
| ·讨论 | 第97-99页 |
| 第五章 Phialophora sp.P13甘露聚糖酶和木聚糖酶的基因克隆与表达 | 第99-119页 |
| 第一节 甘露聚糖酶MAN5AP13的克隆和表达 | 第99-111页 |
| ·实验材料 | 第99-100页 |
| ·菌株、载体 | 第99页 |
| ·引物合成和核酸序列测定 | 第99页 |
| ·试剂盒、工具酶和生化试剂 | 第99页 |
| ·主要仪器 | 第99页 |
| ·试剂 | 第99页 |
| ·培养基配制 | 第99-100页 |
| ·实验方法 | 第100-103页 |
| ·甘露聚糖酶基因man5AP13 DNA的获得 | 第100页 |
| ·甘露聚糖酶基因man5AP13 cDNA的克隆 | 第100-101页 |
| ·甘露聚糖酶MAN5AP13在毕赤酵母中的表达和纯化 | 第101-102页 |
| ·酶活测定和性质分析 | 第102页 |
| ·水解产物分析 | 第102-103页 |
| ·在模拟胃液中的稳定性 | 第103页 |
| ·在模拟胃液中对甘露聚糖(LBG)的降解能力 | 第103页 |
| ·结果与分析 | 第103-109页 |
| ·序列与结构分析 | 第103-105页 |
| ·蛋白表达和纯化 | 第105页 |
| ·性质测定 | 第105-108页 |
| ·底物特异性和动力学分析 | 第108页 |
| ·水解产物分析 | 第108页 |
| ·重组酶在模拟胃液中的稳定性 | 第108-109页 |
| ·重组酶MAN5AP13在模拟胃液条件下对甘露聚糖的降解能力 | 第109页 |
| ·讨论 | 第109-111页 |
| 第二节 改进简并PCR克隆来源于Phialophora sp.P13的木聚糖酶基因 | 第111-119页 |
| ·实验材料 | 第111页 |
| ·菌株、载体 | 第111页 |
| ·引物合成和核酸序列测定 | 第111页 |
| ·试剂盒、工具酶和生化试剂 | 第111页 |
| ·主要仪器 | 第111页 |
| ·试剂 | 第111页 |
| ·培养基配制 | 第111页 |
| ·实验方法 | 第111-114页 |
| ·RNA的提取和反转录 | 第111-112页 |
| ·以cDNA为模板克隆木聚糖酶和内切葡聚糖酶保守区 | 第112页 |
| ·基因全长的获得 | 第112-113页 |
| ·表达载体的构建 | 第113页 |
| ·木聚糖酶基因在毕赤酵母中的表达和纯化 | 第113页 |
| ·活性重组子的筛选和摇瓶水平的诱导 | 第113页 |
| ·重组木聚糖酶的纯化 | 第113-114页 |
| ·重组酶性质测定 | 第114页 |
| ·底物特异性和动力学分析 | 第114页 |
| ·结果与分析 | 第114-118页 |
| ·序列与结构分析 | 第114-116页 |
| ·蛋白表达和纯化 | 第116页 |
| ·性质测定 | 第116-118页 |
| ·底物特异性和动力学分析 | 第118页 |
| ·讨论 | 第118-119页 |
| 第六章 全文结论 | 第119-121页 |
| 参考文献 | 第121-135页 |
| 致谢 | 第135-136页 |
| 作者简历 | 第136-137页 |
