| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 第一章 绪论 | 第10-20页 |
| ·卤醇脱卤酶的研究现状与前景 | 第11-15页 |
| ·卤醇脱卤酶的脱卤活性和开环活性 | 第11-13页 |
| ·HheA 和 HheC 的异同 | 第13-14页 |
| ·对 HheA 进行改造具有重要意义 | 第14-15页 |
| ·酶的半理性改造 | 第15-18页 |
| ·酶改造方法概述 | 第15-17页 |
| ·对 HheA 的半理性改造 | 第17-18页 |
| ·论文的研究内容 | 第18-20页 |
| 第二章 基于简并引物设计的“small-intelligent”饱和突变方法 | 第20-28页 |
| ·“small-intelligent”饱和突变方法 | 第21-25页 |
| ·“small-intelligent”方法在单位点饱和突变中的建立 | 第21-23页 |
| ·PCR 体系和程序 | 第23-25页 |
| ·“small-intelligent”方法构建文库的质量分析 | 第25页 |
| ·“small-intelligent”方法的推广应用及总结 | 第25-28页 |
| ·“small-intelligent”方法在相近和相邻双位点饱和突变中的应用 | 第25-26页 |
| ·“small-intelligent”方法的普适性分析及总结 | 第26-28页 |
| 第三章 对 HheA 的立体选择性及活性的半理性改造 | 第28-41页 |
| ·材料与方法 | 第28-32页 |
| ·HheA 突变体文库的构建 | 第28-29页 |
| ·HheA 突变体文库的比色法筛选 | 第29页 |
| ·HheA 及其突变体的表达与纯化 | 第29-30页 |
| ·酶促反应动力学拆分 | 第30页 |
| ·稳态动力学参数测定 | 第30-31页 |
| ·野生型 HheA 及其突变体的虚拟底物对接 | 第31-32页 |
| ·结果与分析 | 第32-40页 |
| ·HheA 饱和突变文库的构建与筛选 | 第32-33页 |
| ·野生型 HheA 及其突变体的动力学拆分 | 第33-36页 |
| ·野生型 HheA 及良性突变体的稳态动力学研究 | 第36-37页 |
| ·分子对接分析 | 第37-40页 |
| ·结果与讨论 | 第40-41页 |
| 第四章 对其他影响 HheA 的催化特性的关键残基的预测及初探 | 第41-49页 |
| ·材料与方法 | 第41-43页 |
| ·突变体文库的构建及筛选 | 第41-42页 |
| ·酶促反应及气相检测样品制备 | 第42-43页 |
| ·对 HheA 中 Loop 1 上“热点”残基的预测及改造 | 第43-44页 |
| ·对寻找提高 HheA 对脂肪族底物的立体选择性的“热点”的尝试 | 第44-46页 |
| ·对 HheA 的底物进入与产物释放通道的分析 | 第46-49页 |
| 第五章 对 HheA 的生物催化特性的改造工作的总结和展望 | 第49-53页 |
| ·对已有成果的总结 | 第49-50页 |
| ·对 HheA 后续改造工作的展望 | 第50-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-60页 |
| 攻硕期间的研究成果 | 第60-61页 |
