| 致谢 | 第1-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-14页 |
| 图清单 | 第14页 |
| 表清单 | 第14-15页 |
| 1 绪论 | 第15-23页 |
| ·单核细胞增生李斯特菌的简介 | 第15-16页 |
| ·生物学特征 | 第15页 |
| ·危害 | 第15-16页 |
| ·基因组特征 | 第16页 |
| ·LM 的快速检测方法 | 第16-18页 |
| ·传统的检测方法 | 第17页 |
| ·双重 PCR 的检测方法 | 第17页 |
| ·荧光定量 PCR 的检测方法 | 第17-18页 |
| ·LM 的自溶素 | 第18-21页 |
| ·自溶素相关基因在基因组中的分布 | 第18-19页 |
| ·已鉴定自溶素基因的结构与功能 | 第19-21页 |
| ·选题意义和研究内容 | 第21-23页 |
| ·选题意义 | 第21页 |
| ·研究内容 | 第21-23页 |
| 2 单增李斯特菌在蜂蜜和蜂王浆中的生存 | 第23-25页 |
| ·材料 | 第23页 |
| ·菌种 | 第23页 |
| ·主要试剂 | 第23页 |
| ·主要仪器 | 第23页 |
| ·方法 | 第23-24页 |
| ·细菌复苏 | 第23页 |
| ·蜂产品的人工污染实验 | 第23-24页 |
| ·结果与分析 | 第24页 |
| ·讨论 | 第24-25页 |
| 3 单增李斯特菌在蜂产品中快速检测方法的建立 | 第25-35页 |
| ·材料 | 第25-26页 |
| ·菌种 | 第25页 |
| ·主要试剂和酶 | 第25-26页 |
| ·主要仪器 | 第26页 |
| ·引物和探针 | 第26页 |
| ·方法 | 第26-29页 |
| ·细菌增菌培养 | 第26-27页 |
| ·溶菌酶+蛋白酶 K 法提取 LM 基因组 DNA | 第27页 |
| ·双重 PCR 扩增 | 第27-28页 |
| ·单增李斯特菌 hly 基因克隆与标准品的构建 | 第28页 |
| ·人工污染蜂蜜样品的检测 | 第28-29页 |
| ·结果与分析 | 第29-33页 |
| ·双重 PCR 结果 | 第29页 |
| ·扩增片段的特异性分析 | 第29-30页 |
| ·双重 PCR 技术检测人工污染的蜂王浆和蜂蜜 | 第30-31页 |
| ·荧光定量的标准曲线 | 第31-32页 |
| ·荧光定量 PCR 技术检测人工污染蜂王浆样品的扩增曲线 | 第32页 |
| ·荧光定量 PCR 技术检测人工污染蜂蜜样品的扩增曲线 | 第32-33页 |
| ·讨论 | 第33-35页 |
| 4 假定自溶素基因 lmo1521 的原核表达分析 | 第35-52页 |
| ·材料 | 第35-37页 |
| ·菌株和载体 | 第35页 |
| ·主要试剂和酶 | 第35页 |
| ·试剂配制 | 第35-36页 |
| ·主要仪器 | 第36-37页 |
| ·引物 | 第37页 |
| ·方法 | 第37-43页 |
| ·提取基因组 DNA | 第37-38页 |
| ·PCR 扩增 lmo1521 基因片段 | 第38页 |
| ·插入基因片段的制备 | 第38-39页 |
| ·连接载体的制备 | 第39页 |
| ·lmo1521 基因片段与 pET-22b 载体的连接 | 第39页 |
| ·连接产物的转化 | 第39页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第39页 |
| ·重组质粒的转化至 BL21（DE3）和诱导表达 | 第39-40页 |
| ·SDS-PAGE 蛋白质电泳鉴定 | 第40-41页 |
| ·Western-blot 鉴定 | 第41-42页 |
| ·表达条件的优化 | 第42页 |
| ·Ni-NTA 琼脂糖凝胶柱纯化蛋白 | 第42-43页 |
| ·复性 SDS-PAGE 验证 lmo1521 蛋白活性 | 第43页 |
| ·结果与分析 | 第43-49页 |
| ·lmo1521 基因片段的扩增 | 第43页 |
| ·重组质粒的双酶切和测序验证 | 第43-45页 |
| ·重组蛋白的预测 | 第45页 |
| ·融合蛋白的诱导表达 | 第45页 |
| ·Western-blot 鉴定结果 | 第45-46页 |
| ·可溶性目的蛋白的获得 | 第46-48页 |
| ·镍柱纯化蛋白的结果 | 第48-49页 |
| ·lmo1521 融合蛋白的自溶素功能 | 第49页 |
| ·讨论 | 第49-52页 |
| 5 总结与展望 | 第52-54页 |
| ·研究总结 | 第52页 |
| ·课题展望 | 第52-54页 |
| 参考文献 | 第54-59页 |
| 附录 单增李斯特菌 hly 基因克隆与标准品的构建 | 第59-62页 |
| 作者简历 | 第62页 |
