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利用单根肌纤维法分离和培养猪骨骼肌卫星细胞及其成肌诱导分化研究

摘要第1-7页
ABSTRACT第7-12页
文献综述第12-22页
 第一章 出生后骨骼肌再生机制概述第12-15页
   ·骨骼肌发育的一般原理第12-13页
   ·哺乳动物出生后骨骼肌的再生机制第13-15页
 第二章 骨骼肌卫星细胞的生物学特性第15-19页
   ·骨骼肌卫星细胞的起源第15页
   ·骨骼肌卫星细胞的激活第15-16页
   ·骨骼肌卫星细胞的自我更新和干细胞潜能第16-17页
   ·骨骼肌卫星细胞的增殖与分化的分子调节机制第17-19页
     ·骨骼肌卫星细胞增殖的分子调节机制第17页
     ·骨骼肌卫星细胞分化的分子调节机制第17-19页
 第三章 骨骼肌卫星细胞体外培养方法的研究进展第19-22页
   ·骨骼肌卫星细胞体外培养的方法第19-20页
     ·差速贴壁法第19页
     ·密度梯度离心法第19-20页
     ·单根肌纤维法第20页
   ·骨骼肌卫星细胞的鉴定第20页
     ·形态学鉴定第20页
     ·成肌特异性蛋白第20页
   ·单根肌纤维法分离、培养骨骼肌卫星细胞的影响因素第20-22页
     ·微环境第20-21页
     ·血清第21页
     ·生长因子第21页
     ·实验动物及骨骼肌种类第21-22页
实验研究第22-44页
 前言第22-23页
 第四章 单根肌纤维的分离和培养第23-29页
   ·材料第23-24页
     ·实验动物第23页
     ·主要仪器设备第23页
     ·主要试剂及其配制第23-24页
   ·方法第24-25页
     ·培养皿的预处理第24页
     ·EDL 的分离第24页
     ·EDL 的消化第24-25页
     ·单根肌纤维的培养第25页
     ·免疫荧光染色第25页
   ·结果与分析第25-27页
     ·猪骨骼肌纤维的形态特征第25-26页
     ·单根肌纤维的培养第26-27页
     ·猪骨骼肌纤维上卫星细胞的鉴定第27页
   ·讨论第27-28页
   ·小结第28-29页
 第五章 猪骨骼肌卫星细胞的鉴定、传代培养和增殖研究第29-39页
   ·材料第29-30页
     ·实验动物第29页
     ·主要试剂及其配置第29-30页
     ·主要仪器设备第30页
   ·实验方法第30-32页
     ·去除单根骨骼肌纤维第30页
     ·传代培养猪骨骼肌卫星细胞第30页
     ·骨骼肌卫星细胞的鉴定第30页
     ·总RNA 提取第30页
     ·PCR 扩增第30-31页
     ·骨骼肌卫星细胞的纯度检测第31页
     ·绘制骨骼肌卫星细胞的生长曲线第31页
     ·鸡胚提取物对骨骼肌卫星细胞增殖的影响第31页
     ·Western blotting 检测第31-32页
     ·数据分析第32页
   ·结果与分析第32-37页
     ·猪骨骼肌卫星细胞的形态学观察第32页
     ·猪骨骼肌卫星细胞的鉴定第32-33页
     ·猪骨骼肌卫星细胞的纯度检测第33-34页
     ·猪骨骼肌卫星细胞的生长曲线绘制第34-35页
     ·猪骨骼肌卫星细胞的传代培养第35页
     ·CEE 对猪骨骼肌卫星细胞增殖的影响第35页
     ·RT-PCR 检测成肌特异性基因的表达第35-36页
     ·Western blot 检测成肌特异性蛋白的表达第36-37页
   ·讨论第37-38页
   ·小结第38-39页
 第六章 不同培养体系对猪骨骼肌卫星细胞成肌分化的影响第39-44页
   ·材料第39-40页
     ·实验动物第39页
     ·主要试剂及其配备第39-40页
     ·主要仪器第40页
   ·方法第40-41页
     ·培养皿的预处理第40页
     ·传代培养猪骨骼肌卫星细胞第40页
     ·猪骨骼肌卫星细胞的成肌诱导分化第40页
     ·免疫荧光染色第40页
     ·Western blot 检测第40-41页
   ·结果与分析第41-43页
     ·不同培养体系处理对猪骨骼肌卫星细胞形态的影响第41-42页
     ·免疫荧光染色分析不同培养体系下猪骨骼肌卫星细胞的分化水平第42页
     ·不同培养体系下猪骨骼肌卫星细胞成肌分化标记蛋白的表达变化第42-43页
   ·讨论第43页
   ·小结第43-44页
结论第44-45页
创新点第45页
进一步研究内容第45-46页
参考文献第46-52页
附录第52-59页
致谢第59-60页
作者简介第60页

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