| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-39页 |
| ·乳糖酶简介 | 第15-29页 |
| ·乳糖酶的微生物来源 | 第15-19页 |
| ·乳糖酶的特性 | 第19-24页 |
| ·产乳糖酶微生物的遗传改良 | 第24-25页 |
| ·乳糖酶的应用 | 第25-29页 |
| ·菊粉酶简介 | 第29-30页 |
| ·酵母菌中的葡萄糖阻遏作用 | 第30-33页 |
| ·葡萄糖阻遏的控制水平 | 第30-31页 |
| ·葡萄糖阻遏的调控模型 | 第31页 |
| ·Mig1 蛋白与葡萄糖阻遏之间的关系 | 第31-32页 |
| ·Snfl 复合体与葡萄糖阻遏的关系 | 第32-33页 |
| ·基因敲除的方法 | 第33-37页 |
| ·利用同源重组技术进行基因敲除 | 第33-35页 |
| ·利用随机插入突变进行基因敲除 | 第35-36页 |
| ·利用 RNAi 技术进行基因敲除 | 第36-37页 |
| ·本论文研究的目的意义和主要内容 | 第37-39页 |
| ·本论文研究的目的意义 | 第37页 |
| ·本论文研究的主要内容 | 第37-39页 |
| 第二章 K. marxianus km 菌株 MIG1 基因的敲除对酶合成及其基因表达的影响 | 第39-65页 |
| ·引言 | 第39-40页 |
| ·实验材料 | 第40-41页 |
| ·实验菌株与质粒 | 第40页 |
| ·培养基 | 第40-41页 |
| ·试剂 | 第41页 |
| ·实验方法 | 第41-52页 |
| ·细胞生长量的测定 | 第41-42页 |
| ·K. marxianus km 菌株葡萄糖阻遏作用的验证 | 第42页 |
| ·K. marxianus km 菌株抗性验证 | 第42页 |
| ·K. marxianus km 菌株基因组 DNA 的提取 | 第42-43页 |
| ·MIG1 基因敲除载体的构建 | 第43-46页 |
| ·质粒的提取、酶切及回收用于转化酵母的 DNA 片段 | 第46-47页 |
| ·K. marxianus km 菌株感受态的制备 | 第47页 |
| ·转化与筛选 | 第47-48页 |
| ·MIG1 基因敲除的验证 | 第48页 |
| ·K. marxianus km 菌株和 MIG1 基因敲除菌株 km-15 生长曲线的测定 | 第48-49页 |
| ·乳糖酶的制备和活性的测定 | 第49页 |
| ·菊粉酶的制备和活性的测定 | 第49-50页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的制备和活性的测定 | 第50页 |
| ·总 RNA 的提取 | 第50-51页 |
| ·实时荧光定量 PCR | 第51-52页 |
| ·结果与讨论 | 第52-64页 |
| ·K. marxianus km 菌株葡萄糖阻遏作用的验证 | 第52-53页 |
| ·K. marxianus km 菌株抗性验证 | 第53页 |
| ·K. marxianus km 菌株基因组 DNA 的提取 | 第53-54页 |
| ·MIG1 基因敲除载体的构建 | 第54-55页 |
| ·K. marxianus km 菌株的转化与筛选 | 第55-57页 |
| ·MIG1 基因敲除的验证结果 | 第57-59页 |
| ·K. marxianus km 菌株和 MIG1 基因敲除菌株 km-15 的生长曲线 | 第59-60页 |
| ·总 RNA 的提取 | 第60-61页 |
| ·敲除菌株 km-15 和野生型菌株 km 酶的生产及其它们基因的表达情况 | 第61-64页 |
| ·本章小结 | 第64-65页 |
| 第三章 MIG1基因敲除菌株K. marxianus km-15产乳糖酶发酵条件优化及酶法水解乳糖条件的研究 | 第65-88页 |
| ·引言 | 第65-66页 |
| ·实验材料 | 第66页 |
| ·实验菌株 | 第66页 |
| ·培养基 | 第66页 |
| ·实验方法 | 第66-72页 |
| ·培养方法 | 第66-67页 |
| ·胞内乳糖酶提取方法的选择 | 第67页 |
| ·乳糖酶的活性测定 | 第67页 |
| ·菌体生长量的测定 | 第67页 |
| ·总糖含量的测定 | 第67-68页 |
| ·乳糖含量的测定 | 第68页 |
| ·发酵培养基的优化 | 第68-69页 |
| ·最适培养条件下的产酶及菌体生长曲线 | 第69页 |
| ·2-L 发酵罐发酵产酶 | 第69页 |
| ·固体乳糖酶制剂的制备 | 第69页 |
| ·葡萄糖含量的测定 | 第69-70页 |
| ·乳糖水解率的计算 | 第70页 |
| ·水解条件对乳糖水解的影响 | 第70-71页 |
| ·乳清水解实验 | 第71页 |
| ·牛奶水解实验 | 第71页 |
| ·薄层层析分析（TLC） | 第71-72页 |
| ·结果与讨论 | 第72-86页 |
| ·胞内乳糖酶提取方法的选择 | 第72-73页 |
| ·乳糖含量的测定 | 第73-74页 |
| ·发酵培养基的优化 | 第74-77页 |
| ·最适培养条件下的产酶及菌体生长曲线 | 第77-78页 |
| ·2-L 发酵罐发酵产酶 | 第78-80页 |
| ·乳糖酶制剂的制备 | 第80-81页 |
| ·水解条件对乳糖水解的影响 | 第81-83页 |
| ·乳清粉水解实验 | 第83-84页 |
| ·牛奶水解实验 | 第84-85页 |
| ·薄层层析 | 第85-86页 |
| ·本章小结 | 第86-88页 |
| 第四章 MIG1 基因敲除菌株 K. marxianus km-15 产菊粉酶发酵条件的优化及酶法水解菊粉条件的研究 | 第88-103页 |
| ·引言 | 第88-89页 |
| ·实验材料 | 第89页 |
| ·实验菌株 | 第89页 |
| ·培养基 | 第89页 |
| ·实验方法 | 第89-92页 |
| ·培养方法 | 第89页 |
| ·菊粉酶的活性测定 | 第89页 |
| ·菌体生长量的测定 | 第89-90页 |
| ·菊芋浸汁的制备 | 第90页 |
| ·总糖含量的测定 | 第90页 |
| ·发酵培养基的优化 | 第90页 |
| ·最适培养条件下菌体生长及产酶曲线 | 第90-91页 |
| ·2-L 发酵罐发酵产酶 | 第91页 |
| ·还原糖含量的测定 | 第91页 |
| ·菊粉水解率的计算 | 第91页 |
| ·菊粉酶水解菊粉条件研究 | 第91-92页 |
| ·薄层层析 | 第92页 |
| ·结果与讨论 | 第92-101页 |
| ·发酵培养基的优化 | 第92-95页 |
| ·最适培养条件下菌体生长及产酶曲线 | 第95-96页 |
| ·2-L 发酵罐发酵产酶 | 第96-98页 |
| ·菊粉酶水解菊粉条件研究 | 第98-100页 |
| ·薄层层析 | 第100-101页 |
| ·本章小结 | 第101-103页 |
| 第五章 G. pullulans 17-1 菌株的诱变及乳糖酶发酵条件的优化 | 第103-126页 |
| ·引言 | 第103页 |
| ·实验材料 | 第103-104页 |
| ·菌株 | 第103-104页 |
| ·培养基 | 第104页 |
| ·实验方法 | 第104-109页 |
| ·培养方法 | 第104页 |
| ·乳糖酶活力的测定 | 第104-105页 |
| ·菌体生长量的测定 | 第105页 |
| ·葡萄糖含量的测定 | 第105页 |
| ·总糖含量的测定 | 第105页 |
| ·乳糖含量的测定 | 第105页 |
| ·亚硝基胍诱变 | 第105-106页 |
| ·突变菌株 NTG-133 与野生型菌株 17-1 的葡萄糖阻遏 | 第106-107页 |
| ·发酵培养基及培养条件的优化 | 第107页 |
| ·最适发酵条件下菌体生长及产酶曲线 | 第107页 |
| ·2-L 发酵罐发酵产酶 | 第107页 |
| ·突变菌株 NTG-133 与野生型菌株 17-1 的比较 | 第107-108页 |
| ·乳糖水解率的计算 | 第108页 |
| ·水解条件对乳糖水解的影响 | 第108页 |
| ·乳清粉水解实验 | 第108页 |
| ·薄层层析 | 第108-109页 |
| ·结果与讨论 | 第109-124页 |
| ·亚硝基胍诱变剂量的选择 | 第109页 |
| ·菌株诱变筛选结果 | 第109-111页 |
| ·诱变菌株遗传稳定性试验 | 第111页 |
| ·诱变菌株 NTG-133 与野生型菌株 17-1 的葡萄糖阻遏 | 第111-112页 |
| ·发酵培养基及培养条件的优化 | 第112-116页 |
| ·最适发酵条件下菌体生长及产酶曲线 | 第116-117页 |
| ·2-L 发酵罐发酵产酶 | 第117-118页 |
| ·突变菌株 NTG-133 与野生型菌株 17-1 的比较 | 第118-120页 |
| ·水解条件对乳糖水解的影响 | 第120-123页 |
| ·乳清粉水解实验 | 第123页 |
| ·薄层层析 | 第123-124页 |
| ·本章小结 | 第124-126页 |
| 总结与创新点 | 第126-128页 |
| 参考文献 | 第128-143页 |
| 附录：英文缩写符号及中英文对照表 | 第143-144页 |
| 致谢 | 第144-145页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第145页 |
