抗辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶(NRDR)单克隆抗体的制备和鉴定
| 中文摘要 | 第1-6页 |
| 英文摘要 | 第6-12页 |
| 一、引言 | 第12-16页 |
| 二、材料与方法 | 第16-37页 |
| 1. 材料 | 第16-19页 |
| ·动物及细胞 | 第16页 |
| ·主要器材 | 第16-17页 |
| ·主要试剂 | 第17-19页 |
| ·抗原制备试剂 | 第17-18页 |
| ·单克隆抗体制备试剂 | 第18页 |
| ·单克隆抗体鉴定试剂 | 第18-19页 |
| 2. 方法 | 第19-37页 |
| ·重组表达兔NRDR抗原蛋白的准备 | 第19-25页 |
| ·菌株的活化 | 第19-20页 |
| ·重组兔NRDR的小量诱导表达 | 第20-22页 |
| ·重组蛋白兔NRDR的大量诱导表达 | 第22页 |
| ·菌株冻存 | 第22-23页 |
| ·重组兔NRDR的提取 | 第23页 |
| ·重组兔NRDR亲和层析纯化 | 第23-24页 |
| ·纯化所得重组兔NRDR蛋白定量测定 | 第24-25页 |
| ·抗兔NRDR单克隆抗体的制备 | 第25-33页 |
| ·免疫动物 | 第25-26页 |
| ·骨髓瘤细胞NS-1 复苏与培养 | 第26-27页 |
| ·免疫小鼠血清效价测定 | 第27-28页 |
| ·饲养细胞的制备 | 第28-29页 |
| ·细胞融合 | 第29-30页 |
| ·测定细胞融合率及融合细胞的抗体阳性率 | 第30页 |
| ·杂交瘤细胞的筛选(间接ELISA法) | 第30-31页 |
| ·克隆化(有限稀释法)及建株 | 第31-32页 |
| ·杂交瘤细胞的扩增与保存 | 第32页 |
| ·腹水单克隆抗体的制备 | 第32-33页 |
| ·杂交瘤细胞的复苏与传代 | 第33页 |
| ·单克隆抗体的鉴定 | 第33-37页 |
| ·单克隆抗体效价测定 | 第33页 |
| ·单克隆抗体Ig亚类测定 | 第33-34页 |
| ·单克隆抗体特异性的鉴定 | 第34-36页 |
| ·单克隆抗体相对亲和力的比较 | 第36-37页 |
| 三、结果 | 第37-44页 |
| 1. 重组表达兔NRDR抗原蛋白的准备 | 第37-39页 |
| ·菌株的活化 | 第37页 |
| ·重组蛋白兔NRDR的诱导表达 | 第37页 |
| ·重组兔NRDR亲和层析纯化 | 第37-38页 |
| ·纯化所得重组兔NRDR定量测定 | 第38-39页 |
| 2. 抗兔NRDR单克隆抗体的制备 | 第39-41页 |
| ·细胞准备 | 第39页 |
| ·免疫小鼠血清效价 | 第39页 |
| ·细胞融合 | 第39页 |
| ·细胞融合率及融合细胞的抗体阳性率 | 第39-40页 |
| ·杂交瘤细胞的建株及单抗大量制备 | 第40-41页 |
| 3. 单克隆抗体的鉴定 | 第41-44页 |
| ·单克隆抗体效价的测定 | 第41页 |
| ·杂交瘤上清效价 | 第41页 |
| ·腹水效价 | 第41页 |
| ·单克隆抗体Ig亚类的鉴定 | 第41-42页 |
| ·单克隆抗体的免疫反应特异性鉴定 | 第42-43页 |
| ·单克隆抗体相对亲和力的比较 | 第43-44页 |
| 四、讨论 | 第44-47页 |
| 五、结论 | 第47-48页 |
| 六、参考文献 | 第48-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 个人简历 | 第53页 |