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抗辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶(NRDR)单克隆抗体的制备和鉴定

中文摘要第1-6页
英文摘要第6-12页
一、引言第12-16页
二、材料与方法第16-37页
 1. 材料第16-19页
   ·动物及细胞第16页
   ·主要器材第16-17页
   ·主要试剂第17-19页
     ·抗原制备试剂第17-18页
     ·单克隆抗体制备试剂第18页
     ·单克隆抗体鉴定试剂第18-19页
 2. 方法第19-37页
   ·重组表达兔NRDR抗原蛋白的准备第19-25页
     ·菌株的活化第19-20页
     ·重组兔NRDR的小量诱导表达第20-22页
     ·重组蛋白兔NRDR的大量诱导表达第22页
     ·菌株冻存第22-23页
     ·重组兔NRDR的提取第23页
     ·重组兔NRDR亲和层析纯化第23-24页
     ·纯化所得重组兔NRDR蛋白定量测定第24-25页
   ·抗兔NRDR单克隆抗体的制备第25-33页
     ·免疫动物第25-26页
     ·骨髓瘤细胞NS-1 复苏与培养第26-27页
     ·免疫小鼠血清效价测定第27-28页
     ·饲养细胞的制备第28-29页
     ·细胞融合第29-30页
     ·测定细胞融合率及融合细胞的抗体阳性率第30页
     ·杂交瘤细胞的筛选(间接ELISA法)第30-31页
     ·克隆化(有限稀释法)及建株第31-32页
     ·杂交瘤细胞的扩增与保存第32页
     ·腹水单克隆抗体的制备第32-33页
     ·杂交瘤细胞的复苏与传代第33页
   ·单克隆抗体的鉴定第33-37页
     ·单克隆抗体效价测定第33页
     ·单克隆抗体Ig亚类测定第33-34页
     ·单克隆抗体特异性的鉴定第34-36页
     ·单克隆抗体相对亲和力的比较第36-37页
三、结果第37-44页
 1. 重组表达兔NRDR抗原蛋白的准备第37-39页
   ·菌株的活化第37页
   ·重组蛋白兔NRDR的诱导表达第37页
   ·重组兔NRDR亲和层析纯化第37-38页
   ·纯化所得重组兔NRDR定量测定第38-39页
 2. 抗兔NRDR单克隆抗体的制备第39-41页
   ·细胞准备第39页
   ·免疫小鼠血清效价第39页
   ·细胞融合第39页
   ·细胞融合率及融合细胞的抗体阳性率第39-40页
   ·杂交瘤细胞的建株及单抗大量制备第40-41页
 3. 单克隆抗体的鉴定第41-44页
   ·单克隆抗体效价的测定第41页
     ·杂交瘤上清效价第41页
     ·腹水效价第41页
   ·单克隆抗体Ig亚类的鉴定第41-42页
   ·单克隆抗体的免疫反应特异性鉴定第42-43页
   ·单克隆抗体相对亲和力的比较第43-44页
四、讨论第44-47页
五、结论第47-48页
六、参考文献第48-52页
致谢第52-53页
个人简历第53页

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