| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 1 绪论 | 第12-30页 |
| ·紫杉醇及其来源 | 第13-17页 |
| ·天然红豆杉植物中提取紫杉醇 | 第14页 |
| ·化学全合成紫杉醇 | 第14页 |
| ·生物/化学半合成生产紫杉醇 | 第14-15页 |
| ·红豆杉细胞培养生产紫杉醇 | 第15-16页 |
| ·从红豆杉近缘科属植物提取紫杉醇 | 第16页 |
| ·微生物发酵法生产紫杉醇 | 第16-17页 |
| ·紫杉醇的生物合成途径 | 第17-19页 |
| ·紫杉醇生物合成的酶及基因 | 第19-20页 |
| ·提高紫杉醇产量的途径 | 第20-22页 |
| ·红豆杉及产紫杉醇真菌的遗传转化 | 第22-23页 |
| ·真核生物的转化方法 | 第22-23页 |
| ·红豆杉及产紫杉醇真菌的遗传转化研究进展 | 第23页 |
| ·构建紫杉醇高产细胞株的ATMT技术 | 第23-26页 |
| ·根癌农杆菌的转化机理 | 第24-25页 |
| ·农杆菌载体的构建 | 第25页 |
| ·影响T-NDA转移的因素 | 第25-26页 |
| ·紫杉醇合成的转录调控 | 第26-28页 |
| ·转录因子对植物次生代谢的调节作用及机理 | 第26-27页 |
| ·研究转录因子的方法 | 第27-28页 |
| ·本研究的主要内容及目的 | 第28-30页 |
| 2 产紫杉醇真菌的筛选 | 第30-41页 |
| ·引言 | 第30页 |
| ·材料与方法 | 第30-34页 |
| ·材料 | 第30-32页 |
| ·方法 | 第32-34页 |
| ·结果 | 第34-38页 |
| ·讨论 | 第38-41页 |
| 3 产紫杉醇真菌的鉴定 | 第41-53页 |
| ·引言 | 第41页 |
| ·材料和方法 | 第41-43页 |
| ·材料 | 第41页 |
| ·方法 | 第41-43页 |
| ·结果 | 第43-51页 |
| ·菌株MD2的形态特征和鉴定 | 第43-46页 |
| ·菌株MD3的形态特征和鉴定 | 第46-49页 |
| ·菌株YN6的形态特征和鉴定 | 第49-51页 |
| ·dbat基因全长的扩增和分析 | 第51页 |
| ·讨论 | 第51-53页 |
| 4 产紫杉醇真菌发酵条件的初步优化 | 第53-64页 |
| ·引言 | 第53页 |
| ·材料与方法 | 第53-56页 |
| ·材料 | 第53-54页 |
| ·方法 | 第54-56页 |
| ·结果 | 第56-62页 |
| ·培养基的选择 | 第56页 |
| ·pH对紫杉醇合成的影响 | 第56-57页 |
| ·温度对紫杉醇合成的影响 | 第57-58页 |
| ·摇床转速对紫杉醇合成的影响 | 第58页 |
| ·培养时间与紫杉醇产量的关系 | 第58-59页 |
| ·前体物对紫杉醇合成的影响 | 第59-62页 |
| ·讨论 | 第62-64页 |
| 5 农杆菌介导转化体系的建立 | 第64-75页 |
| ·引言 | 第64页 |
| ·材料和方法 | 第64-68页 |
| ·材料 | 第64-65页 |
| ·根癌农杆菌介导的遗传转化体系的建立 | 第65-68页 |
| ·结果 | 第68-74页 |
| ·MD2对潮霉素、头孢菌素的敏感性实验 | 第68-69页 |
| ·转化子的PCR检测 | 第69-70页 |
| ·共培养温度对MD2转化的影响 | 第70页 |
| ·孢子浓度对转化的影响 | 第70-71页 |
| ·农杆菌生长时期及初始菌量对转化的影响 | 第71页 |
| ·共培养时摇床转速对转化的影响 | 第71-72页 |
| ·共培养时间对转化的影响 | 第72页 |
| ·乙酰丁香酮对转化的影响 | 第72-74页 |
| ·讨论 | 第74-75页 |
| 6 紫杉醇高产转基因细胞系和菌株选育 | 第75-95页 |
| ·引言 | 第75-76页 |
| ·材料和方法 | 第76-80页 |
| ·材料 | 第76页 |
| ·方法 | 第76-80页 |
| ·结果 | 第80-93页 |
| ·载体的构建 | 第80-84页 |
| ·潮霉素、头孢菌素对亮白曲霉MD3、曼地亚红豆杉细胞生长的影响 | 第84-85页 |
| ·转基因菌株、细胞株的遗传转化分析 | 第85-93页 |
| ·讨论 | 第93-95页 |
| 7 dbat基因启动子的克隆与鉴定 | 第95-105页 |
| ·引言 | 第95-96页 |
| ·材料和方法 | 第96-99页 |
| ·材料 | 第96-97页 |
| ·dbat基因5’-侧翼序列的扩增 | 第97-98页 |
| ·启动子活性检测分析 | 第98-99页 |
| ·结果 | 第99-104页 |
| ·dbat基因5’-侧翼序列的扩增 | 第100-101页 |
| ·zd-p功能鉴定 | 第101-102页 |
| ·napin基因启动子的克隆和分析 | 第102-104页 |
| ·讨论 | 第104-105页 |
| 8 结论与展望 | 第105-108页 |
| 致谢 | 第108-109页 |
| 参考文献 | 第109-123页 |
| 攻读博士期间发表、拟发表文章和专利 | 第123页 |