| 中文摘要 | 第1-10页 |
| 英文摘要 | 第10-12页 |
| 1 引言 | 第12-24页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第12-13页 |
| ·文献综述 | 第13-22页 |
| ·传统筛选标记 | 第13页 |
| ·筛选标记基因的消除 | 第13-15页 |
| ·植物无筛选标记转基因技术 | 第15页 |
| ·生物安全筛选标记基因 | 第15-21页 |
| ·甲硫氨酸和赖氨酸代谢途径 | 第21-22页 |
| ·本论文的主要研究内容 | 第22-24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-41页 |
| ·CGS1,DHDPS基因克隆及体外分子改造 | 第24-30页 |
| ·试验材料 | 第24-25页 |
| ·试验方法 | 第25-30页 |
| ·DHDPS和突变基因的原核表达 | 第30-32页 |
| ·试验材料 | 第30-31页 |
| ·试验方法 | 第31-32页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第32-33页 |
| ·试验材料 | 第32-33页 |
| ·试验方法 | 第33页 |
| ·卡那霉素及其氨基酸类似物筛选压力的确定 | 第33-34页 |
| ·试验材料 | 第33-34页 |
| ·试验方法 | 第34页 |
| ·农杆菌介导的遗传转化及抗性植株再生 | 第34-36页 |
| ·试验材料 | 第34-35页 |
| ·试验方法 | 第35-36页 |
| ·烟草抗性植株的分子生物学检测 | 第36-41页 |
| ·PCR检测 | 第36-38页 |
| ·外源基因转录水平的Real-time PCR检测 | 第38-40页 |
| ·氨基酸含量检测 | 第40-41页 |
| 3 结果与分析 | 第41-70页 |
| ·CGS1,DHDPS基因克隆及体外分子改造 | 第41-46页 |
| ·拟南芥和烟草总RNA的提取 | 第41页 |
| ·RT-PCR方法克隆得到CGS1和DHDPS基因片段 | 第41-43页 |
| ·CGS1基因的定点突变 | 第43-44页 |
| ·DHDPS基因的定点突变 | 第44-46页 |
| ·DHDPS和DM的原核表达 | 第46-48页 |
| ·DHDPS和突变基因原核表达载体的构建 | 第46-47页 |
| ·序列比对与ORF分析 | 第47-48页 |
| ·目的蛋白在大肠杆菌中的表达 | 第48页 |
| ·植物表达载体构建 | 第48-54页 |
| ·植物表达载体pBIC的构建 | 第48-50页 |
| ·植物表达载体pBICMⅠ的构建 | 第50-51页 |
| ·植物表达载体pBICMⅡ的构建 | 第51-52页 |
| ·植物表达载体pBID的构建 | 第52-53页 |
| ·植物表达载体pBIDM的构建 | 第53-54页 |
| ·重组质粒导入根癌农杆菌 | 第54-56页 |
| ·卡那霉素及其氨基酸类似物筛选压力的确定 | 第56-61页 |
| ·那霉素筛选压力的确定 | 第56-57页 |
| ·乙硫氨酸筛选压力的确定 | 第57-59页 |
| ·S-2-氨基乙基-L-半胱氨酸筛选压力的确定 | 第59-61页 |
| ·农杆菌介导的遗传转化及抗性植株再生 | 第61-63页 |
| ·烟草的遗传转化 | 第61页 |
| ·抗性植株筛选 | 第61-63页 |
| ·抗性芽再生 | 第63页 |
| ·抗性植株的二次筛选 | 第63-64页 |
| ·抗性植株的分子生物学检测 | 第64-70页 |
| ·抗性植株的PCR检测 | 第64-66页 |
| ·外源基因转录水平的Real-Time PCR检测 | 第66-69页 |
| ·氨基酸含量检测 | 第69-70页 |
| 4 讨论 | 第70-72页 |
| ·氨基酸代谢关键酶基因的选择 | 第70页 |
| ·体外分子改造 | 第70页 |
| ·二次交叉筛选 | 第70页 |
| ·分子生物学检测 | 第70页 |
| ·下一步工作展望 | 第70-72页 |
| 5 结论 | 第72-73页 |
| ·野生型基因的克隆及体外分子改造 | 第72页 |
| ·植物表达载体构建 | 第72页 |
| ·农杆菌介导的遗传转化 | 第72页 |
| ·新型筛选标记的分析 | 第72-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-80页 |
| 附录 | 第80-84页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第84页 |
