| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 缩略词表 | 第9-11页 |
| 前言 | 第11-19页 |
| 1. 核糖体展示技术概况 | 第11-13页 |
| 2. 核糖体展示技术的应用 | 第13-15页 |
| ·筛选目标蛋白 | 第13-14页 |
| ·实现蛋白质的体外进化 | 第14-15页 |
| 3. 核糖体展示技术的前景与展望 | 第15-16页 |
| 4. 壬基酚污染状况、危害及快速检测的现状 | 第16-19页 |
| 正文 | 第19-61页 |
| 1. 概述 | 第19-20页 |
| 2. 实验材料与设备 | 第20-23页 |
| ·实验材料 | 第20-22页 |
| ·菌株和质粒 | 第20页 |
| ·工具酶和试剂盒 | 第20页 |
| ·其他化学或生物试剂 | 第20-21页 |
| ·实验动物 | 第21页 |
| ·引物合成与测序 | 第21页 |
| ·其他部分试剂配方 | 第21-22页 |
| ·主要仪器设备 | 第22-23页 |
| 3. 实验方法 | 第23-41页 |
| ·技术路线图 | 第23页 |
| ·壬基酚蛋白结合物的鉴定 | 第23-25页 |
| ·BCA~(TM) 蛋白定量试剂盒测定壬基酚蛋白结合物中蛋白含量 | 第23-24页 |
| ·紫外光谱分析 | 第24页 |
| ·SDS-PAGE 分析 | 第24-25页 |
| ·小鼠 ScFv 库的构建过程 | 第25-34页 |
| ·总 RNA 的提取 | 第25-26页 |
| ·核糖体展示抗体基因库的构建 | 第26-34页 |
| ·DNA 文库的鉴定 | 第34-36页 |
| ·DNA 文库的多样性鉴定 | 第34-35页 |
| ·DNA 库的活性鉴定 | 第35-36页 |
| ·建库后的体外筛选和RT-PCR 过程 | 第36-39页 |
| ·筛选部分 | 第36-38页 |
| ·RT-PCR 重新构建核糖体展示模板 | 第38-39页 |
| ·筛选后鉴定 | 第39-41页 |
| ·筛选结果测序 | 第39页 |
| ·抗体片段的可溶性表达与鉴定 | 第39-41页 |
| 4. 结果与分析 | 第41-56页 |
| ·壬基酚蛋白结合物的鉴定 | 第41-43页 |
| ·结合物溶液中蛋白浓度的测定 | 第41-42页 |
| ·紫外可见分光光度计扫描法鉴定及结合比的计算 | 第42页 |
| ·蛋白质电泳法鉴定 | 第42-43页 |
| ·小鼠脾脏总RNA 的提取 | 第43-44页 |
| ·重链、轻链、间隔序列以及核糖体展示元件的扩增 | 第44-46页 |
| ·重链(VH)、轻链(VL)、间隔序列(P)以及核糖体展示元件(T)的连接 | 第46-48页 |
| ·DNA 文库的鉴定 | 第48-52页 |
| ·测序结果 | 第48-49页 |
| ·单链抗体库库容量的计算方法 | 第49页 |
| ·文库活性鉴定 | 第49-52页 |
| ·体外转录与翻译 | 第52页 |
| ·体外筛选 | 第52-53页 |
| ·筛选后的鉴定 | 第53-54页 |
| ·表达产物鉴定 | 第54-56页 |
| ·SDS-PAGE 鉴定表达蛋白分子量 | 第54-55页 |
| ·ELISA 法测定单链抗体与抗原结合特异性 | 第55-56页 |
| 5. 讨论 | 第56-61页 |
| ·单链抗体 | 第56页 |
| ·抗体库技术 | 第56-57页 |
| ·核糖体展示模板的构建 | 第57-58页 |
| ·体外翻译 | 第58-59页 |
| ·体外筛选 | 第59-60页 |
| ·体外表达和 ELISA 鉴定 | 第60-61页 |
| 全文小结 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |