| 中文摘要 | 第1-9页 |
| 英文摘要 | 第9-11页 |
| 1 引言 | 第11-19页 |
| ·病原学 | 第11页 |
| ·IBDV的基因组结构和编码的蛋白 | 第11-13页 |
| ·IBD流行病学 | 第13页 |
| ·IBDV抗原与毒力变异的分子基础 | 第13-14页 |
| ·IBD的防制 | 第14页 |
| ·IBDV的VP1基因(RdRp)研究进展 | 第14-17页 |
| ·研究的背景、目的和意义 | 第17-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-30页 |
| ·试验材料 | 第19-21页 |
| ·病毒、细胞和实验动物 | 第19页 |
| ·菌株、质粒和表达载体 | 第19-20页 |
| ·主要试剂 | 第20页 |
| ·主要仪器设备 | 第20-21页 |
| ·引物 | 第21页 |
| ·实验方法 | 第21-30页 |
| ·IBDV VP1的原核表达及其多克隆抗体的制备 | 第21-23页 |
| ·IBDV VP1单克隆抗体的制备与鉴定 | 第23-27页 |
| ·稳定表达IBDV VP1的Vero E6细胞系的建立 | 第27-30页 |
| 3 结果与分析 | 第30-40页 |
| ·IBDV VP1的原核表达及其多克隆抗体的制备 | 第30-33页 |
| ·原核表达载体的构建和鉴定 | 第30页 |
| ·表达产物SDS-PAGE电泳分析 | 第30-31页 |
| ·Western blot分析 | 第31-32页 |
| ·鼠抗VP1蛋白多克隆抗体的制备和鉴定 | 第32-33页 |
| ·鼠抗VP1蛋白多克隆抗体的效价测定和间接免疫荧光试验 | 第33页 |
| ·VP1单克隆抗体的制备与鉴定 | 第33-36页 |
| ·重组蛋白pET32a-VP1包被ELISA方法最佳工作条件的建立 | 第33-34页 |
| ·细胞融合率与阳性率的计算 | 第34页 |
| ·单克隆抗体的筛选与单克隆杂交瘤细胞株的建立 | 第34页 |
| ·单克隆抗体效价的测定 | 第34-35页 |
| ·单克隆抗体亚类鉴定 | 第35页 |
| ·染色体分析 | 第35页 |
| ·杂交瘤细胞稳定性分析 | 第35页 |
| ·间接免疫荧光实验 | 第35-36页 |
| ·Western blot分析 | 第36页 |
| ·稳定表达IBDV VP1的Vero E6细胞系的建立 | 第36-40页 |
| ·重组质粒pCI-neo/VP1和pEGFP-N1/VP1的鉴定 | 第36-37页 |
| ·G418工作浓度的确定 | 第37页 |
| ·G418筛选Vero E6细胞的阳性克隆 | 第37页 |
| ·pEGFP-N1/VP1的EGFP表达检测 | 第37-38页 |
| ·pCI-neo/VP1的间接免疫荧光表达分析 | 第38-39页 |
| ·RT-PCR检测稳定转染细胞的mRNA | 第39-40页 |
| 4 讨论 | 第40-43页 |
| ·IBOV VP1原核表达载体的构建与诱导表达 | 第40页 |
| ·免疫原的制备与免疫佐剂的选择 | 第40-41页 |
| ·细胞的融合及单克隆细胞株筛选 | 第41页 |
| ·真核表达载体的选择和G481的选择培养 | 第41-42页 |
| ·细胞系的细胞克隆和基因整合 | 第42-43页 |
| 5 结论 | 第43-44页 |
| 致谢 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-49页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第49页 |
