酿酒酵母S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因的克隆及表达研究
| 第一章 绪论 | 第1-28页 |
| ·S-腺苷甲硫氨酸的生理功能 | 第14-17页 |
| ·S-腺苷甲硫氨酸在体内的代谢循环 | 第14-16页 |
| ·S-腺苷甲硫氨酸的生理功能 | 第16-17页 |
| ·S-腺苷甲硫氨酸的应用 | 第17页 |
| ·S-腺苷甲硫氨酸生产的研究历史及现状 | 第17-25页 |
| ·S-腺苷甲硫氨酸生产工艺的研究 | 第17-22页 |
| ·化学法生产SAM的研究 | 第17-18页 |
| ·微生物发酵法生产SAM的研究 | 第18-20页 |
| ·酶促转化法生产SAM的研究 | 第20-22页 |
| ·S-腺苷甲硫氨酸稳定性研究 | 第22-24页 |
| ·S-腺苷甲硫氨酸失活机理 | 第22-23页 |
| ·S-腺苷甲硫氨酸稳定性盐的开发 | 第23-24页 |
| ·S-腺苷甲硫氨酸的提取、分离纯化及测定 | 第24-25页 |
| ·S-腺苷甲硫氨酸的提取及分离纯化 | 第24-25页 |
| ·S-腺苷甲硫氨酸的测定 | 第25页 |
| ·论文的立题背景及研究内容 | 第25-28页 |
| 第二章 S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因的克隆 | 第28-46页 |
| ·实验材料 | 第28-30页 |
| ·实验仪器 | 第28-29页 |
| ·载体与菌株 | 第29页 |
| ·酶及主要试剂 | 第29页 |
| ·培养基 | 第29-30页 |
| ·实验方法 | 第30-40页 |
| ·酿酒酵母基因组DNA的提取 | 第30-31页 |
| ·主要缓冲液和溶液 | 第30页 |
| ·酿酒酵母基因组DNA的提取方法 | 第30-31页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳定性检测DNA | 第31页 |
| ·PCR扩增目的基因sam2 | 第31-34页 |
| ·引物的设计与合成 | 第32页 |
| ·PCR反应条件 | 第32-33页 |
| ·PCR反应产物的纯化 | 第33-34页 |
| ·重组载体pUCm-T-sam2构建及转化 | 第34-40页 |
| ·克隆载体pUCm-T-sam2的构建 | 第34-36页 |
| ·pUCm-T-sam2的转化 | 第36-37页 |
| ·重组子的筛选和初步鉴定 | 第37-40页 |
| ·结果与讨论 | 第40-45页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第40-41页 |
| ·PCR反应 | 第41页 |
| ·菌落PCR筛选阳性克隆 | 第41-42页 |
| ·阳性克隆的酶切鉴定 | 第42-43页 |
| ·目的基因序列测定及结果分析 | 第43-45页 |
| ·小结 | 第45-46页 |
| 第三章 SAM合成酶基因表达载体的构建及表达 | 第46-60页 |
| ·实验材料 | 第46-47页 |
| ·实验仪器 | 第46页 |
| ·载体及试剂 | 第46-47页 |
| ·实验方法 | 第47-53页 |
| ·表达载体pET-sam2的构建及转化 | 第47-49页 |
| ·sam2的诱导表达 | 第49-52页 |
| ·sam2基因的诱导表达 | 第49-50页 |
| ·SDS-PAGE电泳检测表达结果 | 第50-51页 |
| ·不同条件对表达的影响 | 第51-52页 |
| ·SAM合成酶酶活的测定 | 第52-53页 |
| ·结果与讨论 | 第53-59页 |
| ·PCR初步筛选阳性菌株 | 第53-54页 |
| ·阳性克隆的酶切鉴定 | 第54页 |
| ·诱导时间对表达量的影响 | 第54-55页 |
| ·IPTG浓度对表达量的影响 | 第55-56页 |
| ·温度对表达量的影响 | 第56-57页 |
| ·SAM合成酶酶活测定结果 | 第57-59页 |
| ·小结 | 第59-60页 |
| 第四章 结论 | 第60-62页 |
| 参考文献 | 第62-68页 |
| 附录 | 第68-74页 |
| 致谢 | 第74-76页 |
| 研究成果及发表的学术论文 | 第76-78页 |
| 导师和作者简介 | 第78页 |
