He-Ne激光-PEG复合诱导枯草芽孢杆菌与黑曲霉的原生质体融合的研究
| 一、前言 | 第1-10页 |
| (一) 本文研究的目的及意义 | 第8页 |
| (二) 本文的研究特点 | 第8-10页 |
| 二、文献回顾 | 第10-25页 |
| (一) 枯草芽孢杆菌的特点、应用及研究进展 | 第10-12页 |
| 1. 枯草芽孢杆菌简介 | 第10页 |
| 2. 枯草芽孢杆菌作为饲料添加菌的特点及优点 | 第10-11页 |
| 3. 枯草芽孢杆菌的研究进展 | 第11-12页 |
| (二) 黑曲霉简介及研究进展 | 第12-13页 |
| 1. 黑曲霉简介 | 第12页 |
| 2. 黑曲霉的特点及应用 | 第12-13页 |
| 3. 黑曲霉的研究进展 | 第13页 |
| (三) 原生质体技术 | 第13-18页 |
| 1. 原生质体融合的概念 | 第13-14页 |
| 2. 细胞融合的机理 | 第14-15页 |
| 3. 原生质体融合中亲本的选择标记及检出 | 第15-17页 |
| 4. 融合子的鉴定 | 第17页 |
| 5. 原生质体融合的优点 | 第17-18页 |
| (四) 激光技术 | 第18-19页 |
| (五) 糖化酶介绍 | 第19-25页 |
| 1. 淀粉酶的概述 | 第19-20页 |
| 2. 糖化酶的产生菌与分类 | 第20页 |
| 3. 糖化酶的结构 | 第20-22页 |
| 4. 糖化酶的作用机理 | 第22-24页 |
| 5. 糖化酶的研究进展 | 第24-25页 |
| 三、材料和方法 | 第25-36页 |
| (一) 实验材料与仪器 | 第25-28页 |
| 1. 出发菌株 | 第25页 |
| 2. 培养基 | 第25页 |
| 3. 主要药品及试剂 | 第25-28页 |
| 4. 主要仪器 | 第28页 |
| (二) 主要测定方法 | 第28-36页 |
| 1. 糖化酶与蛋白酶酶活的测定 | 第28-30页 |
| ·糖化酶活的测定 | 第28-29页 |
| ·蛋白酶活的测定 | 第29-30页 |
| 2. 同工酶分析 | 第30-32页 |
| 3. 枯草芽孢杆菌生长曲线的测定 | 第32页 |
| 4. 原生质体的制备与再生 | 第32-33页 |
| 5. 单激光对双亲原生质体分别诱变的作用 | 第33-34页 |
| 6. 原生质体的灭活 | 第34页 |
| ·MC7原生质体的紫外灭活 | 第34页 |
| ·UV-11原生质体的热灭活 | 第34页 |
| 7. 原生质体的融合 | 第34-35页 |
| ·PEG诱导的原生质体融合 | 第34页 |
| ·单激光诱导的原生质体融合 | 第34页 |
| ·PEG与激光复合诱导原生质体融合 | 第34-35页 |
| ·融合率的计算 | 第35页 |
| 8. 融合子的鉴定 | 第35-36页 |
| ·融合子产糖化酶能力分析 | 第35页 |
| ·酯酶同工酶谱分析 | 第35页 |
| ·融合子遗传稳定性分析 | 第35-36页 |
| 四、结果与讨论 | 第36-56页 |
| (一) 糖化酶与蛋白酶酶活的测定 | 第36-37页 |
| 1. 糖化酶活的标准曲线 | 第36页 |
| 2. 蛋白酶活的标准曲线 | 第36-37页 |
| (二) 枯草芽孢杆菌生长曲线 | 第37页 |
| (三) 原生质体的制备与再生 | 第37-45页 |
| 1. 青霉素浓度对 MC7原生质体形成率的影响 | 第37-38页 |
| 2. 原生质体制备最佳酶解条件选择 | 第38-45页 |
| ·MC7原生质体制备最佳酶解条件选择 | 第38-42页 |
| ·黑曲霉原生质体制备最佳酶解条件选择 | 第42-45页 |
| (四) 激光对 MC7与黑曲霉原生质体的诱变作用 | 第45-49页 |
| 1. 激光对MC7原生质体的诱变作用 | 第45-47页 |
| 2. 激光对黑曲霉原生质体的诱变作用 | 第47-49页 |
| (五) 原生质体灭活 | 第49-50页 |
| 1. MC7的紫外灭活 | 第49页 |
| 2. UV-11的热灭活 | 第49-50页 |
| (六) 原生质体的融合 | 第50-53页 |
| 1. PEG诱导的原生质体融合 | 第50-51页 |
| 2. 激光诱导的原生质体融合 | 第51-52页 |
| 3. PEG与激光复合诱导原生质体融合 | 第52-53页 |
| (七) 融合子的分析鉴定 | 第53-55页 |
| 1. 融合子产酶能力的分析 | 第53-54页 |
| 2. 酯酶同工酶谱分析 | 第54-55页 |
| (八) 融合子稳定性的测定 | 第55-56页 |
| 五、实验小结 | 第56-57页 |
| (一) 结论 | 第56页 |
| (二) 本研究有待解决的问题 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-62页 |
| 图版说明 | 第62-64页 |
| 致谢 | 第64页 |
