| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 缩写 | 第8-9页 |
| 第1章 文献综述 | 第9-28页 |
| 1．1 镇痛药物——眼睛蛇神经毒素 | 第9-13页 |
| 1．1．1 疼痛与镇痛药物 | 第9-10页 |
| 1．1．1．1 疼痛的危害和神经学机理 | 第9页 |
| 1．1．1．2 镇痛药物 | 第9-10页 |
| 1．1．2 眼镜蛇神经毒素 | 第10-13页 |
| 1．1．2．1 来源及分类 | 第10页 |
| 1．1．2．2 理化性质 | 第10页 |
| 1．1．2．3 分子结构 | 第10-11页 |
| 1．1．2．4 镇痛机理 | 第11-12页 |
| 1．1．2．5 分离纯化 | 第12-13页 |
| 1．1．2．6 临床应用 | 第13页 |
| 1．2 蛋白质药物的PEG修饰 | 第13-25页 |
| 1．2．1 PEG修饰蛋白质技术在生物医药领域的应用 | 第14-15页 |
| 1．2．2 PEG的结构与基本生物学性质 | 第15页 |
| 1．2．3 PEG修饰反应的类型 | 第15-19页 |
| 1．2．3．1 氨基的修饰 | 第15-17页 |
| 1．2．3．2 半胱氨酸(巯基)的修饰 | 第17-18页 |
| 1．2．3．3 氧化的糖或N端的修饰 | 第18-19页 |
| 1．2．4 PEG修饰反应的过程 | 第19页 |
| 1．2．4．1 液相反应 | 第19页 |
| 1．2．4．2 固相反应 | 第19页 |
| 1．2．5 PEG修饰蛋白质的反应方案设计 | 第19-21页 |
| 1．2．5．1 选择合适的活化PEG | 第20页 |
| 1．2．5．2 修饰反应条件的优化 | 第20-21页 |
| 1．2．6 PEG化蛋白质的分析与分离方法 | 第21-25页 |
| 1．2．6．1 PEG修饰蛋白质的分析方法 | 第21-23页 |
| 1．2．6．2 PEG修饰蛋白质的分离纯化方法 | 第23-25页 |
| 1．3 本课题的研究目的和内容 | 第25-28页 |
| 1．3．1 研究目的 | 第25-26页 |
| 1．3．2 研究内容 | 第26-28页 |
| 1．3．2．1 CNT的分离纯化 | 第26页 |
| 1．3．2．2 PEG修饰CNT | 第26-27页 |
| 1．3．2．3 CNT修饰产物性质的测定 | 第27-28页 |
| 第2章 眼镜蛇神经毒素的分离纯化 | 第28-41页 |
| 2．1 引言 | 第28页 |
| 2．2 材料与仪器 | 第28-29页 |
| 2．2．1 主要材料与试剂 | 第28页 |
| 2．2．2 主要仪器和设备 | 第28-29页 |
| 2．3 实验方法 | 第29-34页 |
| 2．3．1 CNT的纯化路线 | 第29页 |
| 2．3．2 CNT的纯化方法 | 第29-30页 |
| 2．3．2．1 离子交换层析(IEC) | 第29-30页 |
| 2．3．2．2 凝胶过滤层析(GFC) | 第30页 |
| 2．3．3 CNT纯度的检测方法 | 第30-33页 |
| 2．3．3．1 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第30-32页 |
| 2．3．3．2 反向高效液相(RP-HPLC) | 第32-33页 |
| 2．3．4 蛋白质浓度的检测方法 | 第33-34页 |
| 2．4 实验结果 | 第34-39页 |
| 2．4．1 眼镜蛇毒粗品的组成 | 第34页 |
| 2．4．2 阳离子交换层析(1EC) | 第34-36页 |
| 2．4．3 凝胶过滤层析(GFC) | 第36-38页 |
| 2．4．4 纯化步骤的得率 | 第38-39页 |
| 2．5 小结 | 第39页 |
| 2．6 讨论 | 第39-41页 |
| 第3章 MPEG对眼镜蛇神经毒素的修饰及产物的纯化 | 第41-60页 |
| 3．1 引言 | 第41页 |
| 3．2 材料与仪器 | 第41页 |
| 3．2．1 主要材料与试剂 | 第41页 |
| 3．2．2 主要仪器与设备 | 第41页 |
| 3．2．3 实验动物 | 第41页 |
| 3．3 实验方法 | 第41-44页 |
| 3．3．1 修饰反应及分离纯化流程 | 第41-42页 |
| 3．3．2 修饰反应 | 第42-43页 |
| 3．3．2．1 与mPEG-SPA 5K的反应 | 第42-43页 |
| 3．3．2．2 与mPEG-ButyrALD 5K的反应 | 第43页 |
| 3．3．3 RP-HPLC检测修饰产物组成 | 第43页 |
| 3．3．4 阳离子交换层析法分离修饰产物 | 第43-44页 |
| 3．3．5 修饰产物纯度检测 | 第44页 |
| 3．3．6 修饰产物的药效研究 | 第44页 |
| 3．3．7 正交试验 | 第44页 |
| 3．4 实验结果 | 第44-57页 |
| 3．4．1 pH和反应摩尔比的预优化 | 第44-48页 |
| 3．4．1．1 与mPEG-SPA5K的反应 | 第44-48页 |
| 3．4．2 修饰产物的分离纯化 | 第48-50页 |
| 3．4．2．1 mPEG-SPA修饰 | 第49页 |
| 3．4．2．2 mPEG-SMB 5K修饰 | 第49-50页 |
| 3．4．2．3 mPEG-ButyrALD 5K修饰 | 第50页 |
| 3．4．3 修饰产物的纯度测定及性质比较 | 第50-55页 |
| 3．4．4 修饰产物的药效比较 | 第55-56页 |
| 3．4．5 正交试验 | 第56-57页 |
| 3．5 小结 | 第57-58页 |
| 3．6 讨论 | 第58-60页 |
| 第4章 修饰产物性质的研究 | 第60-72页 |
| 4．1 引言 | 第60页 |
| 4．2 材料与仪器 | 第60页 |
| 4．2．1 主要材料与试剂 | 第60页 |
| 4．2．2 主要仪器与设备 | 第60页 |
| 4．2．3 实验动物 | 第60页 |
| 4．3 实验方法 | 第60-63页 |
| 4．3．1 Superdex 75 H 10／30柱检测 | 第60-61页 |
| 4．3．2 毛细管区带电泳法检测 | 第61页 |
| 4．3．3 质谱测定分子量 | 第61页 |
| 4．3．4 修饰位点的确定 | 第61-62页 |
| 4．3．4．1 N-端测序 | 第61页 |
| 4．3．4．2 肽图比较 | 第61-62页 |
| 4．3．5 稳定性试验 | 第62页 |
| 4．3．5．1 反复冻融稳定性 | 第62页 |
| 4．3．5．2 热稳定性 | 第62页 |
| 4．3．6 免疫原性试验 | 第62-63页 |
| 4．3．6．1 试剂配制 | 第62页 |
| 4．3．6．2 操作过程 | 第62-63页 |
| 4．3．7 药效试验 | 第63页 |
| 4．3．7．1 急性毒性(LD_(50)) | 第63页 |
| 4．3．7．2 镇痛效果 | 第63页 |
| 4．4 实验结果 | 第63-70页 |
| 4．4．1 Superdex 75 H 10／30柱检测 | 第63-64页 |
| 4．4．2 毛细管电泳法检测 | 第64页 |
| 4．4．3 质谱测定的分子量 | 第64-66页 |
| 4．4．4 修饰位点的确定 | 第66页 |
| 4．4．4．1 N-端序列 | 第66页 |
| 4．4．4．2 肽图比较结果 | 第66页 |
| 4．4．5 稳定性 | 第66-68页 |
| 4．4．5．1 反复冻融稳定性 | 第66-67页 |
| 4．4．5．2 热稳定性 | 第67-68页 |
| 4．4．6 免疫原性 | 第68页 |
| 4．4．7 药效 | 第68-70页 |
| 4．4．7．1 急性毒性(LD_(50)) | 第69页 |
| 4．4．7．2 镇痛效果 | 第69-70页 |
| 4．5 小结 | 第70页 |
| 4．6 讨论 | 第70-72页 |
| 总结与展望 | 第72-74页 |
| 参考文献 | 第74-80页 |
| 学位论文研究工作期间发表的文章及专利 | 第80-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 附录 | 第82-86页 |
