| 中文摘要 | 第1-4页 |
| 英文摘要(abstract) | 第4-7页 |
| 1 引言 | 第7-23页 |
| 1．1 α-苦瓜素的研究进展 | 第7-11页 |
| 1．1．1 α-MMC的酶学活性 | 第7-8页 |
| 1．1．2 α-MMC的分子结构 | 第8页 |
| 1．1．3 α-MMC进入细胞过程 | 第8-9页 |
| 1．1．4 α-MMC的生物学功能 | 第9-11页 |
| 1．2 甲醇毕赤氏酵母P．pastoris表达系统研究进展 | 第11-21页 |
| 1．2．1 P．pastoris的遗传学特性 | 第11页 |
| 1．2．2 P．pastoris的生物学特性 | 第11-12页 |
| 1．2．3 P．pastoris的甲醇代谢途径 | 第12页 |
| 1．2．4 P．pastoris表达系统的构成 | 第12-15页 |
| 1．2．5 影响产物表达的因 | 第15-18页 |
| 1．2．6 重组蛋白的翻译后修饰——糖基化 | 第18-19页 |
| 1．2．7 缺陷及对策 | 第19-21页 |
| 1．3 本研究的目的意义、内容和技术路线 | 第21-23页 |
| 2 材料 | 第23-25页 |
| 2．1 菌株和质粒 | 第23页 |
| 2．2 酶、试剂盒及生化试剂 | 第23-24页 |
| 2．3 主要仪器设备 | 第24-25页 |
| 3 方法 | 第25-40页 |
| 3．1 引物设计与α-MMC基因扩增 | 第25-27页 |
| 3．2 α-MMC基因的克隆与测序 | 第27-29页 |
| 3．3 α-MMC基因酵母重组表达载体的构建及鉴定 | 第29-31页 |
| 3．4 工程菌GS115/pPICα-B/α-MMCC的构建与筛选 | 第31-35页 |
| 3．5 α-MMC基因的诱导表达 | 第35页 |
| 3．6 重组蛋白价MMC的SDS-PAGE电泳分析 | 第35-36页 |
| 3．7 重组蛋白α-MMC的Western blot分析 | 第36-37页 |
| 3．8 重组酵母甲醇诱导条件的优化 | 第37-38页 |
| 3．9 重组蛋白α-MMC的分离与纯化 | 第38页 |
| 3．10 α-MMC生物活性检 | 第38-40页 |
| 4 结果与分析 | 第40-49页 |
| 4．1 α-MMC cDNA的克隆 | 第40-41页 |
| 4．1．1 苦瓜总RNA提取 | 第40页 |
| 4．1．2 利用 RT-PCR技术获取α-MMC cDNA | 第40页 |
| 4．1．3 α-MMCcDNA基因的克隆及鉴定 | 第40-41页 |
| 4．2 pPICZα-B/α-MMCC酵母表达载体的构建及双酶切鉴定 | 第41页 |
| 4．3 工程菌GS115/pPICZα-B/α-MMCC的构建及筛选 | 第41-42页 |
| 4．3．1 酵母转化 | 第41页 |
| 4．3．2 重组酵母阳性克隆的筛选与鉴定 | 第41-42页 |
| 4．4 甲醇诱导条件的优化 | 第42-43页 |
| 4．4．1 BMGY最适pH值的确定 | 第42页 |
| 4．4．2 甲醇最佳诱导时间的确定 | 第42页 |
| 4．4．3 诱导培养基 BMMY最佳pH值的确定 | 第42页 |
| 4．4．4 甲醇诱导终浓度的确定 | 第42-43页 |
| 4．5 重组蛋白Western blot鉴定 | 第43页 |
| 4．6 重组蛋白含量测定 | 第43页 |
| 4．7 重组蛋白的纯化 | 第43页 |
| 4．8 重组蛋白生物学活性测定 | 第43-44页 |
| 附:结果图片 | 第44-49页 |
| 5 讨论 | 第49-53页 |
| 5．1 苦瓜籽 RIP的开发与应用前景 | 第49-50页 |
| 5．2 选择合适的体系(系统)对α-MMC表达及应用的影响 | 第50页 |
| 5．3 毕赤酵母表达系统的应用特点 | 第50-53页 |
| 5．3．1 目的蛋白结构分析 | 第51页 |
| 5．3．2 表达载体的选择 | 第51页 |
| 5．3．3 密码子偏爱性改造 | 第51-52页 |
| 5．3．4 最适拷贝数的确定 | 第52-53页 |
| 6 结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-60页 |
| 附录 | 第60-62页 |
| 致谢 | 第62页 |
