| 摘要 | 第1页 |
| 中文摘要 | 第6-7页 |
| 英文摘要 | 第7-9页 |
| 1 前言 | 第9-25页 |
| ·几丁质、脱乙酰几丁质和壳聚糖的研究概况 | 第10-13页 |
| ·脱乙酰几丁质酶(Chitosanase)的分子生物学研究进展 | 第13-22页 |
| ·脱乙酰几丁质酶的来源 | 第13-14页 |
| ·脱乙酰几丁质酶的分类 | 第14-17页 |
| ·酶对底物的特异性和构型特异性 | 第17-18页 |
| ·脱乙酰几丁质酶基因的结构特征和序列分析 | 第18-21页 |
| ·同源性聚类分析 | 第21-22页 |
| ·ITS序列在微生物鉴定方面的应用 | 第22-23页 |
| ·本研究目的和意义 | 第23-25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-42页 |
| ·菌种的分离与筛选 | 第25-26页 |
| ·材料与试剂 | 第25页 |
| ·土样的采集 | 第25页 |
| ·培养基 | 第25页 |
| ·分离平板培养基 | 第25页 |
| ·菌种发酵液体培养基 | 第25页 |
| ·菌种斜面培养基 | 第25页 |
| ·菌种筛选方法 | 第25-26页 |
| ·粗筛方法 | 第25页 |
| ·摇瓶发酵培养 | 第25-26页 |
| ·脱乙酰几丁质酶活力测定 | 第26页 |
| ·试剂 | 第26页 |
| ·测定方法 | 第26页 |
| ·降解产物的纸层析分析 | 第26-27页 |
| ·试剂与材料 | 第26-27页 |
| ·方法 | 第27页 |
| ·脱乙酰几丁质酶的分离 | 第27-30页 |
| ·不连续非变性凝胶电泳 | 第27-29页 |
| ·主要试剂与材料 | 第27-28页 |
| ·透析袋的处理方法 | 第28页 |
| ·样品的处理 | 第28页 |
| ·非变性凝胶的配制 | 第28页 |
| ·方法 | 第28-29页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第29-30页 |
| ·试剂 | 第29页 |
| ·样品的处理 | 第29页 |
| ·SDS-PAGE的配制 | 第29-30页 |
| ·方法 | 第30页 |
| ·蛋白质测序 | 第30-31页 |
| ·试剂与材料 | 第30页 |
| ·CAPS电印迹缓冲液的配制 | 第30页 |
| ·转PVDF膜 | 第30-31页 |
| ·ITS(Internal Transcribed Spacer)序列的测定 | 第31-37页 |
| ·试剂与材料 | 第31-32页 |
| ·方法 | 第32-37页 |
| ·DNA的提取 | 第32页 |
| ·PCR引物的设计 | 第32页 |
| ·PCR扩增ITS序列 | 第32-33页 |
| ·PCR产物的回收 | 第33-34页 |
| ·回收产物的连接与转化 | 第34-35页 |
| ·宿主菌E.coli XL1感受态细胞的制备 | 第35页 |
| ·连接产物转化宿主菌E.coli XL1的感受态细胞 | 第35-36页 |
| ·克隆载体质粒的酶切鉴定 | 第36-37页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第37页 |
| ·RNA的提取 | 第37-40页 |
| ·试剂 | 第37-39页 |
| ·RNA提取的方法 | 第39-40页 |
| ·反转录 | 第40页 |
| ·实验仪器 | 第40-42页 |
| 3 结果与分析 | 第42-53页 |
| ·产脱乙酰几丁质酶的菌种的筛选 | 第42页 |
| ·E7菌的形态特征 | 第42页 |
| ·各种因素对产酶条件的影响 | 第42-46页 |
| ·培养基pH值对产酶条件的影响 | 第43页 |
| ·培养基脱乙酰几丁质浓度对产酶的影响 | 第43-44页 |
| ·不同金属离子对产酶的影响 | 第44-45页 |
| ·氮源对产酶的影响 | 第45-46页 |
| ·不同时间所形成的产物的情况 | 第46-47页 |
| ·脱乙酰几丁质酶的分离与鉴定 | 第47-48页 |
| ·氨基酸测序结果 | 第48页 |
| ·ITS序列测定 | 第48-51页 |
| ·E7基因组DNA的提取 | 第48页 |
| ·ITS的PCR扩增结果 | 第48-49页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第49-50页 |
| ·序列结果分析 | 第50-51页 |
| ·E7总RNA的提取 | 第51-53页 |
| 4 讨论 | 第53-60页 |
| ·关于产脱乙酰几丁质酶条件的讨论 | 第53-54页 |
| ·酶的分离与纯化 | 第54-56页 |
| ·E7菌株的ITS分析 | 第56-58页 |
| ·3′-RACE法扩增基因序列 | 第58-60页 |
| 结论 | 第60-61页 |
| 附图 | 第61-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-70页 |
