| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-22页 |
| ·判断重组基因克隆的方法概述 | 第13-18页 |
| ·大肠杆菌表达系统中重组子筛选方法及实际工作中遇到的问题 | 第18-19页 |
| ·红色荧光蛋白的介绍 | 第19页 |
| ·该论文的研究目的 | 第19页 |
| ·关于本文所采用的试剂、方法、仪器等的说明 | 第19-22页 |
| 第二章 不同类型启动子对于构建红色荧光蛋白大肠杆菌表达载体的影响 | 第22-36页 |
| 第一节 利用T7启动子构建红色荧光蛋白大肠杆菌表达载体的初步尝试 | 第22-30页 |
| ·引言 | 第22页 |
| ·实验方法 | 第22-24页 |
| ·用T7启动子系统（pET-28a质粒）构建红色荧光蛋白表达载体 | 第22-24页 |
| ·对pET-28aRFP质粒的测序验证 | 第24页 |
| ·结果与讨论 | 第24-28页 |
| ·用T7正向测序结果 | 第24-25页 |
| ·用T7ter反向测序结果 | 第25-26页 |
| ·正反向测序结果拼接得到pET-28aRFP重组基因正确编码序列 | 第26-28页 |
| ·pET-28aRFP重组质粒转化大肠杆菌的现象与分析 | 第28页 |
| ·小结 | 第28-30页 |
| 第二节 利用组成型lac启动子构建红色荧光蛋白大肠杆菌表达载体的改进尝试 | 第30-33页 |
| ·引言 | 第30页 |
| ·实验方法 | 第30页 |
| ·利用lac启动子（pEZZ18质粒）构建红色荧光蛋白表达载体 | 第30页 |
| ·结果与讨论 | 第30-32页 |
| ·pEZZ18-RFP重组质粒转化大肠杆菌后菌落颜色特点分析 | 第30-32页 |
| ·小结 | 第32-33页 |
| 第三节 利用杂合强诱导型tac启动子构建红色荧光蛋白大肠杆菌表达载体的改进尝试 | 第33-36页 |
| ·引言 | 第33页 |
| ·实验方法 | 第33页 |
| ·结果与讨论 | 第33-36页 |
| 第三章 RFP（DsRed2）的全基因合成 | 第36-46页 |
| ·对FRP原始基因（DsRed2）序列的分析 | 第36-37页 |
| ·实验方法 | 第37-41页 |
| ·RFP（DsRed2）基因序列的优化和全基因合成设计 | 第37-41页 |
| ·用全基因合成的RFP（DsRed2）基因构建红色荧光蛋白表达载体 | 第41页 |
| ·结果与讨论 | 第41-43页 |
| ·全基因合成的RFP重组质粒转化大肠杆菌后菌落颜色的特点分析 | 第41-42页 |
| ·全基因合成的RFP（DsRed2）重组克隆的序列测定 | 第42-43页 |
| ·小结 | 第43-46页 |
| 第四章 诱导剂对红色荧光蛋白菌落显色的影响 | 第46-49页 |
| ·引言 | 第46页 |
| ·实验方法及结论 | 第46-47页 |
| ·培养基中添加IPTG对红色荧光蛋白菌落显色的影响 | 第46页 |
| ·在培养基中添加D-半乳糖对红色荧光蛋白菌落显色的影响 | 第46-47页 |
| ·小结 | 第47-49页 |
| 第五章 红色荧光蛋白的理性设计 | 第49-67页 |
| 第一节 红色荧光蛋白的7点突变 | 第49-59页 |
| ·引言 | 第49页 |
| ·实验方法 | 第49-54页 |
| ·对最先使用的28aRFP克隆的7点突变 | 第49-52页 |
| ·对全基因合成的28aZKRFP克隆的7点突变 | 第52-54页 |
| ·结果与讨论 | 第54-57页 |
| ·原始RFP基因7点突变PCR电泳图 | 第54-55页 |
| ·全基因合成RFP突变PCR电泳图 | 第55-56页 |
| ·对两个版本的RFP基因7点突变后的菌落显色结果及分析 | 第56-57页 |
| ·小结 | 第57-59页 |
| 第二节 红色荧光蛋白的3点突变 | 第59-67页 |
| ·引言 | 第59页 |
| ·实验方法 | 第59-60页 |
| ·对原始的RFP和全基因合成的RFP基因的3点突变 | 第59页 |
| ·两个版本的RFP基因3点突变后的克隆方案 | 第59-60页 |
| ·结果与讨论 | 第60-65页 |
| ·原始RFP基因3点突变PCR结果 | 第60-61页 |
| ·全基因合成的RFP基因3点突变PCR结果 | 第61页 |
| ·两个版本的RFP基因3点突变后的实验结果 | 第61-63页 |
| ·30a17cZMCRFP载体转转化后18小时和36小时，在两种固体培养基上的对比实验结果 | 第63-64页 |
| ·30a17cZMCRFP载体序列描述 | 第64-65页 |
| ·小结 | 第65-67页 |
| 第六章 结论 | 第67-70页 |
| 参考文献 | 第70-73页 |
| 附录一 实验方法 | 第73-75页 |
| 附录二 试剂 | 第75-78页 |
| 附录三 仪器设备 | 第78-80页 |
| 致谢 | 第80-82页 |
| 作者及导师简介 | 第82-83页 |
| 附件 | 第83-84页 |
