| 中文摘要 | 第1-13页 |
| 英文摘要 | 第13-15页 |
| 1 引言 | 第15-32页 |
| ·植物次生代谢 | 第15页 |
| ·次生代谢途径 | 第15-16页 |
| ·植物次生代谢基因工程 | 第16-19页 |
| ·调控因子的作用 | 第17页 |
| ·基因的协同转化 | 第17-18页 |
| ·次生代谢物的生理功能 | 第18页 |
| ·次生代谢物的应用 | 第18-19页 |
| ·植物次生代谢中影响花色苷生成的因素及其生理作用 | 第19-29页 |
| ·花色苷简介 | 第19-20页 |
| ·结构 | 第19-20页 |
| ·化学性质 | 第20页 |
| ·花色苷生成中相关基因的简介 | 第20-21页 |
| ·结构基因 | 第20-21页 |
| ·调节基因 | 第21页 |
| ·花青苷合成过程中的酶调节 | 第21-24页 |
| ·苯丙氨酸结氨酶(PAL) | 第22-23页 |
| ·查尔酮合成酶(CHS) | 第23-24页 |
| ·二氢黄酮醇还原酶(DFR) | 第24页 |
| ·UFGT | 第24页 |
| ·影响花色苷颜色和稳定性的物理因素 | 第24-27页 |
| ·结构 | 第24-25页 |
| ·PH | 第25-26页 |
| ·温度 | 第26页 |
| ·氧和过氧化氢 | 第26-27页 |
| ·花色苷的生理活性功能 | 第27-29页 |
| ·抗氧化及消除自由基的功能 | 第27页 |
| ·降低血清及肝脏中脂肪含量的作用 | 第27-28页 |
| ·抗变异及抗肿瘤的作用 | 第28页 |
| ·防止人体内过氧化作用 | 第28页 |
| ·其它生理功能 | 第28-29页 |
| ·本研究的目的意义 | 第29-32页 |
| 2 材料与方法 | 第32-59页 |
| ·实验材料 | 第32-33页 |
| ·植物材料 | 第32页 |
| ·菌株与质粒 | 第32页 |
| ·酶及生化试剂 | 第32页 |
| ·PCR引物 | 第32-33页 |
| ·实验方法 | 第33-58页 |
| ·徒手切片 | 第33页 |
| ·总RNA的提取及检测(trizol) | 第33-34页 |
| ·反转录cDNA第一条链的合成 | 第34页 |
| ·目的基因全长cDNA的分离 | 第34-40页 |
| ·目的基因中间片段的分离 | 第34-38页 |
| ·中间片断的扩增 | 第34-35页 |
| ·连接反应 | 第35页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第35-36页 |
| ·碱法小量提取质粒DNA | 第36-37页 |
| ·质粒DNA的酶切鉴定 | 第37页 |
| ·序列测定 | 第37-38页 |
| ·目的基因cDNA3'端片段的分离(3'-RACE) | 第38页 |
| ·目的基因全长cDNA的克隆 | 第38-40页 |
| ·cDNA纯化 | 第38-39页 |
| ·特异DNA片段的回收 | 第39-40页 |
| ·回收片段末端加碱基A | 第40页 |
| ·Northern杂交 | 第40-44页 |
| ·总RNA的提取 | 第40页 |
| ·mRNA的分离 | 第40-41页 |
| ·甲醛变性胶电泳 | 第41-42页 |
| ·转膜 | 第42-43页 |
| ·预杂交 | 第43页 |
| ·探针的制备 | 第43-44页 |
| ·Southern杂交 | 第44-47页 |
| ·小麦基因组DNA提取(SDS法) | 第44-45页 |
| ·电泳及转膜 | 第45-46页 |
| ·预杂交 | 第46-47页 |
| ·探针制备 | 第47页 |
| ·杂交 | 第47页 |
| ·洗膜及压片 | 第47页 |
| ·原位杂交分析 | 第47-52页 |
| ·材料的固定 | 第47页 |
| ·材料的包埋 | 第47-48页 |
| ·切片 | 第48页 |
| ·探针标记 | 第48-51页 |
| ·脱蜡、消化、乙酰化 | 第51页 |
| ·杂交 | 第51-52页 |
| ·洗片 | 第52页 |
| ·检测 | 第52页 |
| ·农杆菌介导的拟南芥遗传转化 | 第52-57页 |
| ·TaDFR1基因正义表达载体的构建 | 第52-54页 |
| ·根癌农杆菌GV3101感受态的制备与转化 | 第54-55页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第54-55页 |
| ·冻融法转化 | 第55页 |
| ·拟南芥的无土栽培、转化及分析 | 第55-57页 |
| ·无土栽培 | 第55-56页 |
| ·从培养皿中移栽拟南芥 | 第56页 |
| ·拟南芥转化 | 第56-57页 |
| ·转基因植株分析 | 第57页 |
| ·转基因拟南芥的表达分析(RT-PCR) | 第57-58页 |
| ·HPLC分析 | 第58-59页 |
| 3 结果与分析 | 第59-77页 |
| ·花青素的积累 | 第59-60页 |
| ·TaDFR1的分离及其特征 | 第60-67页 |
| ·TaDFR1的分离 | 第60-63页 |
| ·TaDFR1核苷酸序列以及推导的氨基酸序列 | 第63-65页 |
| ·TaDFR1表达产物二级结构预测 | 第65-66页 |
| ·TaDFR1序列同源性比较 | 第66-67页 |
| ·小麦基因组中TaDFR1基因Southern分析 | 第67-68页 |
| ·TaDFR1基因在小麦植株中的表达 | 第68-70页 |
| ·TaDFR1基因在小麦籽粒及胚芽鞘中的时空表达 | 第70-72页 |
| ·TaDFR1正义表达载体的构建及功能分析 | 第72-75页 |
| ·HPLC结果分析 | 第75-77页 |
| 4 讨论 | 第77-80页 |
| ·花青素在黑麦76以及其它有色谷物中积累的相似性 | 第77页 |
| ·TaDFR1基因序列特征分析 | 第77-78页 |
| ·TaDFR基因在转基因拟南芥中的表达分析 | 第78-80页 |
| 5 结论 | 第80-82页 |
| 参考文献 | 第82-97页 |
| 附录一 | 第97-101页 |
| 附录二 | 第101-104页 |
| 致谢 | 第104页 |