草酸脱羧酶的无载体固定化及化学修饰的研究
| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 1 前言 | 第10-21页 |
| ·研究背景 | 第10-14页 |
| ·草酸的结构与来源 | 第10页 |
| ·草酸的危害 | 第10-11页 |
| ·草酸引起的结石问题 | 第11页 |
| ·防治体内草酸水平升高的对策 | 第11-12页 |
| ·降解草酸的酶 | 第12页 |
| ·草酸脱羧酶的来源 | 第12-13页 |
| ·草酸脱羧酶的理化性质 | 第13页 |
| ·草酸脱羧酶降解草酸的研究进展 | 第13-14页 |
| ·无载体固定化 | 第14-17页 |
| ·固定化技术的发展 | 第14-15页 |
| ·无载体固定化技术 | 第15页 |
| ·交联溶解酶（CLEs） | 第15页 |
| ·交联酶晶体（CLECs） | 第15页 |
| ·交联酶聚集体（CLEAs） | 第15-16页 |
| ·CLEAs的制备 | 第16-17页 |
| ·蛋白质的化学修饰 | 第17-21页 |
| ·修饰剂的选择 | 第17页 |
| ·聚乙二醇对蛋白质的修饰 | 第17-18页 |
| ·右旋糖酐对蛋白质的修饰 | 第18-21页 |
| 2 草酸脱羧酶的诱导表达优化 | 第21-30页 |
| ·主要材料 | 第21-22页 |
| ·培养基 | 第21页 |
| ·主要试剂 | 第21页 |
| ·主要仪器 | 第21-22页 |
| ·方法 | 第22-24页 |
| ·酶的抽提 | 第22页 |
| ·酶活性的检测 | 第22页 |
| ·生长曲线的测定 | 第22页 |
| ·诱导条件对重组草酸脱羧酶表达的影响 | 第22-23页 |
| ·正交试验 | 第23-24页 |
| ·结果与分析 | 第24-29页 |
| ·基因工程菌的生长曲线 | 第24页 |
| ·发酵液初始pH对诱导表达的影响 | 第24-25页 |
| ·诱导时机的影响 | 第25-26页 |
| ·诱导时间的影响 | 第26-27页 |
| ·IPTG浓度的影响 | 第27页 |
| ·Mn~(2+)离子对草酸脱羧酶表达的影响 | 第27-28页 |
| ·乳糖协同IPTG诱导表达结果 | 第28-29页 |
| ·正交试验 | 第29页 |
| ·小结 | 第29-30页 |
| 3 交联草酸脱羧酶聚集体的制备及其性质研究 | 第30-42页 |
| ·主要材料 | 第30-31页 |
| ·培养基 | 第30页 |
| ·主要试剂 | 第30-31页 |
| ·主要仪器 | 第31页 |
| ·方法 | 第31-34页 |
| ·草酸脱羧酶的制备 | 第31页 |
| ·草酸脱羧酶的纯化 | 第31-32页 |
| ·蛋白质SDS-PAGE电泳 | 第32-33页 |
| ·草酸脱羧酶聚集体的制备与交联 | 第33页 |
| ·游离草酸脱羧酶和交联草酸脱羧酶聚集体的活性测定 | 第33-34页 |
| ·游离草酸脱羧酶与交联草酸脱羧酶聚集体的性质 | 第34页 |
| ·结果与分析 | 第34-41页 |
| ·草酸脱羧酶的表达 | 第34页 |
| ·草酸脱羧酶的分离纯化 | 第34-36页 |
| ·交联草酸脱羧酶聚集体的制备与条件优化 | 第36-38页 |
| ·游离酶与交联酶聚集体的性质比较 | 第38-41页 |
| ·结论 | 第41-42页 |
| 4 右旋糖酐对草酸脱羧酶的修饰 | 第42-52页 |
| ·主要材料 | 第42-43页 |
| ·培养基 | 第42页 |
| ·主要试剂 | 第42-43页 |
| ·主要仪器34 | 第43页 |
| ·方法 | 第43-46页 |
| ·草酸脱羧酶的制备 | 第43-44页 |
| ·快速蛋白层析系统（FPLC）对草酸脱羧酶的纯化 | 第44页 |
| ·右旋糖酐对草酸脱羧酶修饰条件的优化 | 第44-45页 |
| ·草酸脱羧酶修饰率和酶活保留的测定 | 第45页 |
| ·SDS-PAGE分析 | 第45页 |
| ·IR分析 | 第45页 |
| ·草酸脱羧酶的酶活测定 | 第45-46页 |
| ·修饰前后稳定性比较 | 第46页 |
| ·结果与分析 | 第46-51页 |
| ·草酸脱羧酶的制备 | 第46页 |
| ·草酸脱羧酶的纯化 | 第46-47页 |
| ·草酸脱羧酶的修饰率及酶活回收率 | 第47-48页 |
| ·修饰前后SDS-PAGE结果 | 第48-49页 |
| ·红外光谱分析结果 | 第49页 |
| ·修饰前后pH稳定性对比 | 第49-50页 |
| ·草酸脱羧酶修饰前后的热稳定性比较 | 第50页 |
| ·修饰前后草酸脱羧酶对胰蛋白酶消化道耐受性 | 第50-51页 |
| ·小结 | 第51-52页 |
| 5 结论与展望 | 第52-54页 |
| ·结论 | 第52页 |
| ·展望 | 第52-54页 |
| 参考文献 | 第54-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
