| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-14页 |
| 前言 | 第14-15页 |
| 综述 | 第15-39页 |
| 第一章 抗病基因及其抗病机制研究--综述 | 第15-28页 |
| 1 生物技术的发展、应用及其研究 | 第15页 |
| 2 抗病基因的研究及其现状 | 第15-24页 |
| ·“基因对基因”假说 | 第16-19页 |
| ·“受体--配基”模型 | 第17页 |
| ·护卫(Guard)模型 | 第17-18页 |
| ·蛋白酶决定防卫激发模型 | 第18页 |
| ·基因沉默机制 | 第18-19页 |
| ·主动防御反应----HR、ISR、SAR | 第19-20页 |
| ·病原菌的无毒基因和Avr-蛋白 | 第20-21页 |
| ·抗病基因相关的反应体系 | 第21-23页 |
| ·SA信号转导途径 | 第22页 |
| ·JA／ET信号转导途径 | 第22-23页 |
| ·ROS和NO | 第23-24页 |
| 3 R基因的分类和组成 | 第24-26页 |
| 4 番茄的抗病基因 | 第26-28页 |
| 第二章 番茄Tm-2~2基因--克隆、结构及特性 | 第28-39页 |
| 1 番茄的Tm-2~2基因及其等位基因的来源和特性 | 第28-29页 |
| 2 番茄花叶病毒及烟草花叶病毒的结构及特性 | 第29-30页 |
| 3 Tm-2~2基因及其等位基因的分离和克隆 | 第30-31页 |
| ·Ds／Ac转座子标签法分离番茄的Tm-2~2基因 | 第30页 |
| ·根癌农杆菌转化菌株pTM47和pTM49的获得 | 第30-31页 |
| ·Tm-2和tm-2基因的获得 | 第31页 |
| 4 Tm-2~2基因编码蛋白的氨基酸序列比较 | 第31-33页 |
| 5 Tm-2~2基因编码蛋白对病毒作用位点的分析 | 第33-35页 |
| 6 Tm-2~2基因编码蛋白结构域的研究 | 第35-38页 |
| ·Tm-2~2的NBS结构域90-Gln,100-Arg氨基酸变异对抗病性的影响 | 第35-36页 |
| ·Tm-2~2的NBS结构域221-Ser、238-Met、348-Val三个变异氨基酸对抗病性的影响 | 第36-37页 |
| ·Tm-2~2的NBS结构域与LRR结构域的氨基酸变异对抗病性的影响 | 第37页 |
| ·Tm-2~2C末端10个LRR结构域与抗病性 | 第37-38页 |
| 7 获得嵌合基因转化体的技术路线 | 第38-39页 |
| 材料与方法 | 第39-50页 |
| 第三章 嵌合基因的构建、转化、表达及其抗病反应 | 第39-50页 |
| 1 嵌合基因的构建 | 第39-43页 |
| ·获得两端含有NcoⅠ位点的tm-2基因 | 第39-40页 |
| ·获得SphⅠ-186位点交换的嵌合基因 | 第40页 |
| ·获得NheⅠ-355位点交换的嵌合基因 | 第40-41页 |
| ·获得AatⅡ-452位点交换的嵌合基因 | 第41-42页 |
| ·获得BsaⅠ-611位点交换的嵌合基因 | 第42页 |
| ·构建含有嵌合基因的双元载体 | 第42-43页 |
| 2 嵌合基因的转化与鉴定 | 第43-47页 |
| ·感受态根癌农杆菌的制备 | 第43页 |
| ·电击转化 | 第43-44页 |
| ·农杆菌转化体的鉴定 | 第44-45页 |
| ·菌株的筛选 | 第44页 |
| ·菌株DNA的分离 | 第44页 |
| ·嵌合基因的鉴定 | 第44-45页 |
| ·烟草SR1的转化 | 第45页 |
| ·嵌合基因转化体的分子生物学鉴定 | 第45-47页 |
| ·转化体DNA的提取及纯化 | 第45-46页 |
| ·转化体RNA的提取 | 第46页 |
| ·Poly(A+)RNA的纯化及反转录为cDNA | 第46页 |
| ·Tm-2~2和tm-2特异引物的设计与PCR扩增反应 | 第46-47页 |
| ·烟草转化植株体嵌合基因的鉴定与测序 | 第47页 |
| 3 嵌合基因转化体的抗病反应 | 第47-50页 |
| ·病毒的提取和接种 | 第47页 |
| ·反转录病毒和样品RNA | 第47-48页 |
| ·病毒和样品的测定 | 第48页 |
| ·病毒分离物的名称以及来源 | 第48页 |
| ·SDS-PAGE | 第48-49页 |
| ·细胞组织染色 | 第49页 |
| ·应用软件和网络 | 第49页 |
| ·应用引物 | 第49-50页 |
| 结果与分析 | 第50-61页 |
| 第四章 番茄的Tm-2~2基因及其在烟草的表达 | 第50-57页 |
| 1 Tm-2~2基因的转化和纯合转化体的获得 | 第50-51页 |
| 2 Tm-2~2转基因烟草同样拥有病毒特异抗性 | 第51-53页 |
| 3 病毒株系ToMV-2a引起的细胞死亡与Tm-2~2的自主启动子有关 | 第53-54页 |
| 4 Tm-2~2基因的遗传和分离 | 第54页 |
| 5 Tm-2~2转化体在抗病反应中相关基因的表达 | 第54-57页 |
| ·Tm-2~2转化体中PR基因的表达 | 第54-55页 |
| ·Tm-2~2转化体中MIP基因的表达 | 第55页 |
| ·Tm-2~2转化体中RdRP基因的表达 | 第55-57页 |
| 第五章 亮氨酸重复序列中767-Tyr和769-Ser决定对病毒的抗性 | 第57-61页 |
| 1 Tm-2~2基因编码蛋白的767-Tyr和769-Ser两个亲水性的氨基酸直接与ToMV-0、ToMV-2移动蛋白中的Ser-238和Lys-244两个氨基酸相互识别，并诱导抗病反应 | 第57-59页 |
| 2 Tm-2~2基因编码蛋白的90-Gln，100-Arg、221-Ser、238-Met、348-Val等5个氨基酸的改变对ToMV-0、ToMV-2株系的抗病性没有影响，对ToMV-2a依然感病 | 第59页 |
| 3 Tm-2~2基因编码蛋白的NBS结构域与LRR结构域的氨基酸变异对抗病性的影响是相互独立的 | 第59-60页 |
| 4 Tm-2~2基因编码蛋白LRR的变异氨基酸具有抗病自主性 | 第60-61页 |
| 讨论与结论 | 第61-71页 |
| 第六章 讨论与结论 | 第61-71页 |
| 1 Tm-2~2基因在烟草中的表达表明其抗病的特性没有改变 | 第61页 |
| 2 Tm-2~2基因自主启动子在抗病反应中具有重要作用 | 第61-62页 |
| 3 Tm-2~2基因的编码蛋白与复合蛋白转录因子有关，与RdRP没有直接的联系，能够诱导PR基因的表达 | 第62-64页 |
| 4 Tm-2~2基因产物是一个具有受体结构、激酶特性的膜蛋白 | 第64-66页 |
| 5 Tm-2~2基因的LRR结构域决定对病毒的抗性，767和769两个氨基酸决定对病毒的识别 | 第66-71页 |
| 参考文献 | 第71-81页 |
| 附录 | 第81-95页 |
| 1 附图及附表 | 第81-94页 |
| 2 博士在读期间发表的文章及将要发表的文章 | 第94-95页 |
| 感谢 | 第95页 |
