| 缩写词简表 | 第1-11页 |
| 中文摘要 | 第11-14页 |
| 英文摘要 | 第14-17页 |
| 前言 | 第17-20页 |
| 技术路线 | 第20-23页 |
| 第一章 采用抑制消减杂交技术筛选大鼠心肌短暂缺血-再灌注诱导表达上调的基因 | 第23-42页 |
| 一、 材料和方法 | 第23-32页 |
| 1. 材料 | 第23-24页 |
| ·实验动物 | 第23页 |
| ·试剂 | 第23-24页 |
| ·引物 | 第24页 |
| 2. 方法 | 第24-32页 |
| ·大鼠心肌短暂缺血-再灌注动物模型的建立 | 第24-25页 |
| ·总 RNA 的提取 | 第25页 |
| ·mRNA 的提取 | 第25页 |
| ·抑制消减杂交 | 第25-30页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第25页 |
| ·cDNA 第二链的合成 | 第25-26页 |
| ·双链cDNA 的 RsaⅠ酶切 | 第26页 |
| ·检测子（tester）cDNA 的接头连接 | 第26页 |
| ·连接效率的检测 | 第26-27页 |
| ·消减杂交 | 第27页 |
| ·抑制性 PCR | 第27-28页 |
| ·消减效率的检测 | 第28-29页 |
| ·消减cDNA 文库的构建 | 第29-30页 |
| ·反向 Northern 点杂交初步筛选差异表达基因 | 第30页 |
| ·测序与序列分析 | 第30页 |
| ·RT-PCR 进一步鉴定差异表达 | 第30-31页 |
| ·Northern blot 进一步鉴定差异表达 | 第31-32页 |
| 二、 结果 | 第32-40页 |
| 1. 总 RNA 及mRNA 的提取 | 第32-33页 |
| 2. 双链cDNA 的合成及RsaⅠ酶切 | 第33页 |
| 3. 双链cDNA 与接头的连接效率检测 | 第33-34页 |
| 4. 消减 PCR 产物检测 | 第34-35页 |
| 5. 消减效率的检测 | 第35页 |
| 6. 大鼠心肌缺血-再灌注诱导表达上调基因的消减cDNA 文库的构建 | 第35-36页 |
| 7. 反向 Northern 点杂交初步筛选差异表达基因 | 第36-37页 |
| 8. 测序和序列分析 | 第37-39页 |
| 9. RT-PCR 和 Northern blot 进一步验证差异表达 | 第39-40页 |
| 三、 讨论 | 第40-42页 |
| 第二章 采用cDNA 微阵列结合聚类分析探讨大鼠心肌短暂缺血-再灌注后不同时间点基因表达谱的改变 | 第42-55页 |
| 一、 材料和方法 | 第42-43页 |
| 1. 材料 | 第42页 |
| 2. 方法 | 第42-43页 |
| ·大鼠心肌短暂缺血-再灌注动物模型的制备 | 第42-43页 |
| ·cDNA 芯片检测与分析 | 第43页 |
| ·聚类分析 | 第43页 |
| 二、 结果 | 第43-52页 |
| 1 cDNA 芯片结果 | 第43-49页 |
| 2. 聚类分析 | 第49-52页 |
| 三、 讨论 | 第52-55页 |
| 第三章 大鼠心肌短暂缺血-再灌注诱导表达上调的新基因 Mip1 的克隆和特性分析 | 第55-73页 |
| 一、 材料和方法 | 第55-59页 |
| 1. 材料 | 第55-56页 |
| ·载体和菌株 | 第55页 |
| ·试剂 | 第55-56页 |
| ·引物 | 第56页 |
| 2. 方法 | 第56-59页 |
| ·EST 拼接 | 第56页 |
| ·电子克隆 | 第56-57页 |
| ·RACE 技术获取基因5′末端 | 第57-58页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第57页 |
| ·5′RACE 扩增 | 第57-58页 |
| ·测序和拼接 | 第58页 |
| ·RT-PCR 验证所获基因全长 | 第58页 |
| ·多组织膜 Northern 杂交 | 第58页 |
| ·生物信息学分析 Mip1 的核酸和蛋白质特性 | 第58-59页 |
| 二、 结果 | 第59-71页 |
| 1. EST 拼接与电子克隆 | 第59页 |
| 2. 5′RACE 扩增 | 第59-60页 |
| 3. RT-PCR 验证所获基因全长 | 第60-62页 |
| 4. 多组织膜 Northern 杂交结果 | 第62页 |
| 5. Mip1 的核酸与蛋白质特性的生物信息学分析 | 第62-71页 |
| 三、 讨论 | 第71-73页 |
| 第四章 新基因 Mip1 功能的初步研究 | 第73-90页 |
| 一、 材料和方法 | 第73-81页 |
| 1. 材料 | 第73-74页 |
| ·实验动物 | 第73页 |
| ·细胞 | 第73页 |
| ·载体和菌株 | 第73页 |
| ·试剂 | 第73-74页 |
| 2. 方法 | 第74-81页 |
| ·大鼠心肌短暂缺血-再灌注动物模型的制备 | 第74页 |
| ·Northern blot 检测Mip1 在大鼠心肌短暂缺血-再灌注后不同时间点的表达 | 第74-75页 |
| ·Mip1 的真核表达质粒Mip1-pEGFP-N1 和Mip1-pcDNA3.1/myc-His(-)的构建 | 第75-78页 |
| ·加端 PCR 扩增 Mip1 的 ORF | 第76页 |
| ·PCR 产物及载体的酶切及回收 | 第76-77页 |
| ·连接与转化 | 第77页 |
| ·质粒 DNA 的小量制备 | 第77-78页 |
| ·Mip1-pEGFP-N1 和 Mip1-pcDNA3.1 重组子的鉴定 | 第78页 |
| ·质粒 DNA 的大量制备 | 第78页 |
| ·Mip1 蛋白在正常和活性氧刺激时的亚细胞定位 | 第78-79页 |
| ·稳定表达 Mip1 的 C2C12细胞株的建立 | 第79页 |
| ·转染和 G418 筛选 | 第79页 |
| ·Western blot 筛选高表达克隆 | 第79页 |
| ·H_2O_2浓度的测定 | 第79页 |
| ·H_2O_2损伤实验 | 第79页 |
| ·LDH 释放率检测 | 第79-80页 |
| ·Hoechst 33258 染色检测细胞凋亡发生率 | 第80页 |
| ·流式细胞术检测Mip1对细胞周期的影响 | 第80页 |
| ·统计处理 | 第80-81页 |
| 二、 结果 | 第81-88页 |
| 1. Northern blot 检测Mip1 在大鼠心肌短暂缺血-再灌注后不同时间点的表达 | 第81页 |
| 2. Mip1 蛋白在正常和活性氧刺激时的亚细胞定位 | 第81-84页 |
| ·Mip1-pEGFP-N1 重组质粒的鉴定 | 第81-83页 |
| ·Mip1 蛋白在正常和氧化应激时的亚细胞定位 | 第83-84页 |
| 3. 稳定表达 Mip1 的 C_2C_(12)细胞株的建立 | 第84-85页 |
| ·Mip1-pcDNA3.1/myc-His(-)重组质粒的鉴定 | 第84-85页 |
| ·Western blot 筛选高表达 Mip1 的细胞克隆 | 第85页 |
| 4. LDH 释放率的测定 | 第85-86页 |
| 5. Hoechst 33258 染色检测细胞凋亡发生率 | 第86-87页 |
| 6. 流式细胞术分析Mip1对细胞周期的影响 | 第87-88页 |
| 三、讨论 | 第88-90页 |
| 结论 | 第90-91页 |
| 参考文献 | 第91-98页 |
| 综述1 | 第98-109页 |
| 综述 2 | 第109-116页 |
| 攻读学位期间主要的研究成果目录 | 第116-118页 |
| 致谢 | 第118页 |
