| 中文摘要 | 第1-6页 |
| 英文摘要 | 第6-10页 |
| 一 综述——酶分子的定向进化 | 第10-19页 |
| 1、 酶分子定向进化简介 | 第10-11页 |
| 2、 酶分子定向进化的历史 | 第11-13页 |
| 3、 定向进化技术 | 第13-15页 |
| 4、 定向进化的应用 | 第15-17页 |
| 5、 筛选方法的发展 | 第17页 |
| 6、 总结与展望 | 第17-19页 |
| 二 前言 | 第19-26页 |
| 1、 α-乙酰乳酸与啤酒发酵的关系 | 第19-20页 |
| 2、 α-乙酰乳酸脱羧酶降低啤酒发酵中双乙酰含量的作用 | 第20-21页 |
| 3、 α-ALDC的研究过程 | 第21-23页 |
| 4、 α-ALDC的应用前景 | 第23-24页 |
| 5、 本实验的目的意义和技术路线 | 第24-26页 |
| 三 实验材料和方法 | 第26-37页 |
| 1、 菌株和质粒 | 第26页 |
| 2、 PCR引物的设计合成 | 第26页 |
| 3、 质粒提取 | 第26-28页 |
| 4、 易错PCR | 第28-29页 |
| 5、 琼脂糖凝胶中DNA片段的回收纯化 | 第29-30页 |
| 6、 感受态细胞的制备 | 第30页 |
| 7、 限制性酶切、连接和转化 | 第30-31页 |
| 8、 表达质粒的构建 | 第31-32页 |
| 9、 α-ALDC活性的检测 | 第32-33页 |
| 10、 96孔板微量比活初步筛选 | 第33-34页 |
| 11、 粗测α-ALDC酶活 | 第34页 |
| 12、 α-ALDC的分离、纯化 | 第34-35页 |
| 13、 酶学性质的测定 | 第35页 |
| 14、 测序质粒的构建 | 第35页 |
| 15、 琼脂糖凝胶电泳和SDS-PAGE电泳 | 第35-36页 |
| 16、 测序 | 第36-37页 |
| 四 实验结果 | 第37-55页 |
| 1、 易错PCR | 第37-38页 |
| 2、 载体和插入基因的制备 | 第38-39页 |
| 3、 转化子的筛选及酶切鉴定 | 第39-41页 |
| 4、 突变酶基因的表达 | 第41-42页 |
| 5、 突变酶PBVL33的分离提纯 | 第42-44页 |
| 6、 突变酶与天然酶的酶学性质比较 | 第44-46页 |
| 7、 测序质粒的构建 | 第46-48页 |
| 8、 突变酶与天然酶的基因测序结果比较 | 第48-50页 |
| 9、 氨基酸序列组成及可能的二级结构 | 第50-55页 |
| 五 讨论 | 第55-60页 |
| 1、 易错PCR条件的确立 | 第55页 |
| 2、 筛选方法 | 第55-56页 |
| 3、 定向进化的结果 | 第56-60页 |
| 六 结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-69页 |
| 附图 | 第69-71页 |
| 致谢 | 第71页 |