| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-12页 |
| 第1章 文献综述 | 第12-30页 |
| ·海水养殖重要病原菌—弧菌 | 第12-15页 |
| ·弧菌及其在水体环境中的作用 | 第12-13页 |
| ·费氏弧菌与鱿鱼的共生 | 第13-14页 |
| ·弧菌是人类和动物的致病菌 | 第14-15页 |
| ·溶藻弧菌 | 第15-20页 |
| ·溶藻弧菌的危害 | 第15-16页 |
| ·溶藻弧菌病害的防治 | 第16页 |
| ·溶藻弧菌的毒力因子 | 第16-20页 |
| ·群体感应系统 | 第20-27页 |
| ·酰基高丝氨酸内酯介导的QS系统 | 第21-22页 |
| ·AI-2/LuxS介导的QS系统 | 第22-24页 |
| ·AIP介导的革兰氏阳性(G~+)细菌中的QS系统 | 第24-25页 |
| ·AI3/QseC介导的QS系统 | 第25-27页 |
| ·sRNA分子伴侣蛋白Hfq及sRNA | 第27-28页 |
| ·课题研究内容及意义 | 第28-30页 |
| 第2章 sRNA伴侣蛋白Hfq对溶藻弧菌环境应激能力和毒力的调控 | 第30-59页 |
| ·前言 | 第30页 |
| ·实验材料 | 第30-32页 |
| ·菌株、引物和培养条件 | 第30-32页 |
| ·试剂和试剂盒 | 第32页 |
| ·实验方法 | 第32-42页 |
| ·hfq基因的克隆及测序 | 第32-34页 |
| ·溶藻弧菌EPGS hfq基因框内无标记缺失突变株的构建 | 第34-36页 |
| ·回补菌株fhq~+的构建 | 第36-37页 |
| ·溶藻弧菌生长测定 | 第37页 |
| ·环境应激能力测定 | 第37页 |
| ·生物被膜测定 | 第37页 |
| ·胞外蛋白酶活性的测定 | 第37-38页 |
| ·游动性与泳动性分析 | 第38页 |
| ·实时定量逆转录PCR反应 | 第38-39页 |
| ·蛋白质印迹分析 | 第39-40页 |
| ·GFP与Hfq翻译融合的构建 | 第40-41页 |
| ·鱼体感染及毒力测定 | 第41-42页 |
| ·在斑马鱼体内存活能力测定 | 第42页 |
| ·免疫保护效率测定 | 第42页 |
| ·实验结果 | 第42-55页 |
| ·hfq序列分析及突变株构建 | 第42-44页 |
| ·hfq~+回补株的构建 | 第44-45页 |
| ·Hfq对溶藻弧菌生长的影响 | 第45-46页 |
| ·Hfq对溶藻弧菌运动性的调控 | 第46-47页 |
| ·Hfq对溶藻弧菌生物被膜的调控 | 第47-48页 |
| ·Hfq对溶藻弧菌不同环境压力下的生长调控 | 第48-49页 |
| ·Hfq对溶藻弧菌胞外蛋白酶生成及活性的调控 | 第49-51页 |
| ·Hfq主要通过LuxR实现对溶藻弧菌Asp的调控 | 第51页 |
| ·Hfq对溶藻弧菌毒力的调控 | 第51-53页 |
| ·Hfq对溶藻弧菌在斑马鱼体内存活能力的调控 | 第53-54页 |
| ·Δhfq菌株作为减毒活疫苗的免疫保护效率评价 | 第54-55页 |
| ·讨论 | 第55-58页 |
| ·小结 | 第58-59页 |
| 第3章 LuxT对溶藻弧菌胞外蛋白酶、运动性和毒力的调控 | 第59-78页 |
| ·前言 | 第59页 |
| ·实验材料 | 第59页 |
| ·菌株、引物和培养条件 | 第59页 |
| ·试剂和试剂盒 | 第59页 |
| ·实验方法 | 第59-65页 |
| ·ΔluxT及其回补菌株的构建 | 第59-63页 |
| ·插入失活突变株的构建 | 第63页 |
| ·荧光定量PCR检测法 | 第63页 |
| ·转录融合报告菌株的构建 | 第63-64页 |
| ·双质粒系统的构建 | 第64页 |
| ·β-半乳糖苷酶的活性分析 | 第64页 |
| ·LuxT-GFP翻译融合构建 | 第64-65页 |
| ·Western-blot分析 | 第65页 |
| ·泳动能力测定 | 第65页 |
| ·胞外蛋白酶活性分析 | 第65页 |
| ·鱼体感染实验 | 第65页 |
| ·实验结果 | 第65-74页 |
| ·luxT基因的克隆及序列分析 | 第65-66页 |
| ·luxT基因的转录为细胞密度依赖型 | 第66页 |
| ·群体感应系统对LuxT的正调控作用 | 第66-67页 |
| ·LuxT对溶藻弧菌胞外蛋白酶、运动性及毒力的调控作用 | 第67-69页 |
| ·LuxT对LuxO和LuxR的调控作用 | 第69-74页 |
| ·讨论 | 第74-76页 |
| ·小结 | 第76-78页 |
| 第4章 利用Gateway质粒系统研究溶藻弧菌六型分泌系统元件的功能 | 第78-94页 |
| ·前言 | 第78页 |
| ·实验材料 | 第78-81页 |
| ·菌株、引物和培养条件 | 第78页 |
| ·试剂和试剂盒 | 第78-81页 |
| ·实验方法 | 第81-86页 |
| ·无缝克隆技术 | 第81-82页 |
| ·Gateway克隆技术 | 第82-83页 |
| ·入门质粒的构建 | 第83-84页 |
| ·Destination质粒的构建 | 第84-85页 |
| ·目的片段转移至Destination质粒 | 第85页 |
| ·回补菌株和突变株的筛选 | 第85页 |
| ·Hcp1表达的测定 | 第85-86页 |
| ·菌体表型的分析 | 第86页 |
| ·实验结果 | 第86-92页 |
| ·Gateway兼容型质粒的构建 | 第86页 |
| ·利用Gateway系统表达Hcp1 | 第86-87页 |
| ·利用Gateway兼容型质粒筛选T6SS相关突变株及回补株 | 第87-89页 |
| ·Hcp1在各突变株中的表达及分泌 | 第89页 |
| ·T6SS对溶藻弧菌毒力相关表型的影响 | 第89-92页 |
| ·讨论 | 第92-93页 |
| ·小结 | 第93-94页 |
| 第5章 主要结论和展望 | 第94-97页 |
| ·主要结论 | 第94-95页 |
| ·论文主要创新点 | 第95页 |
| ·展望 | 第95-97页 |
| 参考文献 | 第97-105页 |
| 攻读博士学位期间的论文成果 | 第105-106页 |
| 致谢 | 第106页 |
