中文摘要 | 第1-7页 |
英文摘要 | 第7-9页 |
图表清单 | 第9-10页 |
缩写词表 | 第10-11页 |
前言 | 第11-12页 |
Ⅰ 文献综述 | 第12-28页 |
1. 植物抗虫基因工程的研究进展 | 第12-16页 |
1.1 抗虫基因的种类及其应用 | 第12-16页 |
1.2 植物抗虫基因工程存在的问题及其对策 | 第16页 |
2. 植物凝集素的分子生物学研究进展 | 第16-22页 |
2.1 植物凝集素的定义 | 第16-17页 |
2.2 植物凝集素的分类 | 第17-18页 |
2.3 植物凝集素的性质 | 第18-19页 |
2.4 植物凝集素的功能 | 第19-20页 |
2.5 植物凝集素在基因工程中的应用 | 第20-22页 |
3. 植物基因克隆的方法 | 第22-27页 |
3.1 图谱克隆技术 | 第22页 |
3.2 转座子标签技术 | 第22-23页 |
3.3 基因文库克隆技术 | 第23页 |
3.4 cDNA末端快速扩增技术(RACE) | 第23-27页 |
4. 本研究的意义 | 第27-28页 |
Ⅱ 材料与方法 | 第28-41页 |
ⅰ 材料 | 第28-29页 |
ⅱ 方法 | 第29-41页 |
A. 基因的克隆及其序列特征的分析 | 第30-37页 |
1. 总RNA的提取和检测 | 第30-32页 |
2. cDNA的合成 | 第32页 |
3. 基因的全长克隆(RACE法) | 第32-33页 |
4. 目的片段纯化回收 | 第33-34页 |
5. 片段克隆到pGEM-T Easy载体 | 第34页 |
6. 感受态细胞的制备和连接反应物的转化 | 第34-35页 |
7. 阳性克隆的筛选鉴定 | 第35-36页 |
8. 克隆片段的序列分析 | 第36-37页 |
B. 植物表达载体(p2300zga)的构建 | 第37-39页 |
9. 植物表达载体的构建 | 第37-39页 |
9.1 韭莲凝集素基因编码区(JL ORF)的获得 | 第37-38页 |
9.2 中间载体pCMBIA2300’BS的制备 | 第38页 |
9.3 连接、转化及重组克隆的筛选与鉴定 | 第38页 |
9.4 植物表达载体导入受体农杆菌 | 第38-39页 |
C. 原核表达载体(pET32azga)的构建 | 第39-41页 |
10. 原核表达载体的构建 | 第39-41页 |
10.1 pET载体的制备 | 第39-40页 |
10.2 目的基因插入片段的制备 | 第40页 |
10.3 原核表达载体的构建 | 第40-41页 |
Ⅲ 结果与讨论 | 第41-58页 |
1. 实验结果与分析 | 第41-56页 |
1.1 RNA抽提 | 第41页 |
1.2 基因的全长克隆 | 第41-44页 |
1.3 韭莲凝集素基因序列分析及功能预测 | 第44-53页 |
1.4 植物表达载体的构建 | 第53-55页 |
1.5 原核表达载体的构建 | 第55-56页 |
2. 讨论 | 第56-58页 |
Ⅳ 全文小结 | 第58-59页 |
参考文献 | 第59-66页 |
附录 | 第66-72页 |
致谢 | 第72页 |