| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 前言 | 第11-21页 |
| 一、纤维素乙醇的研究概况 | 第11-13页 |
| 二、纤维素和纤维素酶的研究概况 | 第13-18页 |
| 三、内切纤维素酶的分子进化的研究概况 | 第18-19页 |
| 四、本论文研究的目的意义 | 第19-20页 |
| 五、本实验技术路线 | 第20-21页 |
| 第一章 材料与方法 | 第21-37页 |
| ·实验材料 | 第21-22页 |
| ·菌株与质粒 | 第21页 |
| ·酶与试剂 | 第21-22页 |
| ·主要仪器设备 | 第22页 |
| ·方法与步骤 | 第22-37页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备 | 第22-23页 |
| ·质粒DNA的大量制备 | 第23页 |
| ·质粒DNA的小量制备 | 第23-24页 |
| ·质粒pET-22b(+)/egl3的构建 | 第24-27页 |
| ·刚果红染色法 | 第27页 |
| ·重组菌株的诱导表达 | 第27-28页 |
| ·外源基因在大肠杆菌中的表达检测 | 第28页 |
| ·蛋白质的SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第28页 |
| ·大肠杆菌细胞的破碎与粗酶液的制备 | 第28-29页 |
| ·葡聚糖内切酶EGⅢ的纯化 | 第29页 |
| ·葡聚糖内切酶EGⅢ的活力测定 | 第29-30页 |
| ·蛋白质浓度测定 | 第30页 |
| ·定点饱和突变库的构建 | 第30-36页 |
| ·野生型和突变酶动力学性质比较 | 第36-37页 |
| 第二章 结果与分析 | 第37-45页 |
| ·野生型葡聚糖内切酶EGⅢ基因EGL3在大肠杆菌中的表达 | 第37-39页 |
| ·egl3基因的亚克隆 | 第37-38页 |
| ·EGⅢ的表达及SDS-PAGE分析 | 第38-39页 |
| ·定点饱和突变 | 第39-42页 |
| ·突变点的选择 | 第40-41页 |
| ·EGⅢ定点饱和突变表达质粒的构建 | 第41页 |
| ·突变型egl3基因的序列分析 | 第41-42页 |
| ·野生型和突变酶酶学性质比较 | 第42-45页 |
| ·野生型和突变酶的比活活力、Km值和K_(cat)值的测定 | 第42-43页 |
| ·最适温度和最适pH的比较 | 第43-44页 |
| ·野生酶和突变酶的热稳定性的比较 | 第44-45页 |
| 第三章 讨论 | 第45-49页 |
| ·EGⅢ的定向进化 | 第45-49页 |
| ·同源建模 | 第45-46页 |
| ·ProSa2003对突变位点的分析 | 第46页 |
| ·突变酶的分析 | 第46-49页 |
| 第四章 结论与展望 | 第49-51页 |
| ·结论 | 第49页 |
| ·问题与展望 | 第49-51页 |
| 参考文献 | 第51-59页 |
| 附录1 | 第59-64页 |
| 1、溶液 | 第59-62页 |
| 2、培养基 | 第62-64页 |
| 附录2 | 第64-68页 |
| 1.葡萄糖标准曲线的制作 | 第64-65页 |
| 2.蛋白质浓度测定 | 第65-68页 |
| 附录3 | 第68-70页 |
| 突变体序列比对结果 | 第68-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第71页 |