甘蓝型油菜PEPC基因保守序列的克隆和种子特异性ihpRNA表达载体的构建
| 中文摘要 | 第1-9页 |
| 英文摘要 | 第9-11页 |
| 1.前言 | 第11-29页 |
| ·油菜含油量的研究进展 | 第11-23页 |
| ·我国油菜的分布、产量状况和目前的含油率水平 | 第11页 |
| ·我国食用油消费现状 | 第11页 |
| ·油菜籽油的形成过程 | 第11-16页 |
| ·植物中糖类物质的生成 | 第12页 |
| ·在种子形成过程中蔗糖转化为脂肪酸 | 第12-15页 |
| ·脂肪酸在种子中的储存 | 第15-16页 |
| ·控制菜籽含油量的关键酶 | 第16-21页 |
| ·6-磷酸葡萄糖脱氢酶 | 第16-17页 |
| ·乙酰CoA羧化酶 | 第17页 |
| ·磷脂酸磷酸脂酶 | 第17-18页 |
| ·二脂酰甘油酰基转移酶 | 第18-19页 |
| ·磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶 | 第19-21页 |
| ·油菜含油率改良的主要手段 | 第21-23页 |
| ·常规育种 | 第21页 |
| ·诱变育种 | 第21-22页 |
| ·基因工程技术 | 第22-23页 |
| ·RNAi技术 | 第23-28页 |
| ·RNAi的内含 | 第23页 |
| ·RNAi的历史背景 | 第23-24页 |
| ·RNAi的作用机理 | 第24-26页 |
| ·RNAi的特点 | 第26-27页 |
| ·RNAi在植物中的应用 | 第27-28页 |
| ·RNAi可作为农作物基因改良的有效工具 | 第27-28页 |
| ·RNAi可用于植物抗病研究 | 第28页 |
| ·RNAi在作物品质中的改良应用 | 第28页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第28-29页 |
| 2 材料与方法 | 第29-42页 |
| ·供试材料 | 第29页 |
| ·植物材料 | 第29页 |
| ·菌株 | 第29页 |
| ·载体 | 第29页 |
| ·试剂与酶 | 第29页 |
| ·试剂盒 | 第29页 |
| ·实验方法 | 第29-42页 |
| ·PEPC基因保守序列的选择与确定 | 第29页 |
| ·PCR引物的设计 | 第29-30页 |
| ·油菜DNA的提取 | 第30页 |
| ·E.coli DH5a感受态细胞的制备 | 第30-31页 |
| ·napin启动子的克隆 | 第31-35页 |
| ·PCR扩增 | 第31页 |
| ·PCR产物经琼脂糖凝胶回收试剂盒纯化 | 第31-32页 |
| ·连接克隆载体pMD18-T | 第32-34页 |
| ·重组子鉴定 | 第34-35页 |
| ·重组质粒提取 | 第34-35页 |
| ·BamHI和HindⅢ双酶切鉴定 | 第35页 |
| ·测序和BLAST比对鉴定 | 第35页 |
| ·甘蓝型油菜PEPC基因片段的克隆 | 第35页 |
| ·种子特异表达载体pCAMNapin的构建 | 第35-37页 |
| ·植物表达载体pCAMBIA1391的克隆 | 第35-36页 |
| ·大量提取质粒 | 第36页 |
| ·BamHI和HindⅢ双酶切 | 第36页 |
| ·片段连接与转化 | 第36-37页 |
| ·反向重复框的构建 | 第37-39页 |
| ·酶切载体pMDPEPC | 第37-38页 |
| ·中间载体pBS-NEI-B1的构建 | 第38页 |
| ·反向重复框载体pBS-B2-NEI-B1的构建 | 第38-39页 |
| ·PEPC基因ihpRNA植物表达载体的构建 | 第39-42页 |
| 3 结果与分析 | 第42-51页 |
| ·保守序列寻找与确定 | 第42页 |
| ·PEPC基因片段的克隆及分析 | 第42-44页 |
| ·Napin启动子的克隆及分析 | 第44-49页 |
| ·种子特异表达载体pCAMNapin的构建 | 第49页 |
| ·反向重复框的构建 | 第49-50页 |
| ·种子特异性表达的ihpRNA植物载体构建 | 第50-51页 |
| 4 讨论 | 第51-55页 |
| ·甘蓝型油菜中PEPC基因的特性 | 第51页 |
| ·基因片段的克隆 | 第51-52页 |
| ·启动子的选择 | 第52-53页 |
| ·ihpRNA载体的沉默效率 | 第53-55页 |
| 参考文献 | 第55-62页 |
| 致谢 | 第62页 |
