| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-30页 |
| ·流感病毒 | 第15-22页 |
| ·流感病毒的历史 | 第15-16页 |
| ·流感病毒的分类 | 第16页 |
| ·A 型流感病毒的结构 | 第16-17页 |
| ·A 型流感病毒的基因组成 | 第17-21页 |
| ·高致病性禽流感病毒 | 第21-22页 |
| ·T 细胞表位的研究方法 | 第22-27页 |
| ·表位预测 | 第23页 |
| ·有限稀释法 | 第23-24页 |
| ·~(51)Cr释放试验 | 第24页 |
| ·MHC 四聚体技术 | 第24-25页 |
| ·胞内细胞因子染色 | 第25页 |
| ·酶联免疫斑点法 | 第25-26页 |
| ·荧光测定法 | 第26-27页 |
| ·流感病毒T 细胞表位的研究进展 | 第27-28页 |
| ·研究目的和意义 | 第28-30页 |
| 第二章 鸡Γ-干扰素的实时定量 RT-PCR 检测方法的建立 | 第30-43页 |
| ·实验材料 | 第31-34页 |
| ·实验动物 | 第31页 |
| ·质粒和菌种 | 第31页 |
| ·主要试剂 | 第31页 |
| ·主要溶液和培养基的配置 | 第31-33页 |
| ·主要仪器 | 第33-34页 |
| ·试验方法 | 第34-37页 |
| ·引物设计 | 第34页 |
| ·鸡脾淋巴细胞的分离培养和总RNA 的提取 | 第34-35页 |
| ·ChIFN-γ和Ch28S 基因的扩增 | 第35页 |
| ·所扩增ChIFN-γ基因的进化分析 | 第35页 |
| ·重组体外转录载体的构建与鉴定 | 第35页 |
| ·体外转录模板的制备 | 第35-36页 |
| ·ChIFN-γ基因和Ch28S 基因的体外转录 | 第36页 |
| ·转录产物的纯化 | 第36页 |
| ·转录产物的鉴定及定量 | 第36页 |
| ·标准曲线的绘制 | 第36-37页 |
| ·结果 | 第37-41页 |
| ·ChIFN-γ和Ch28S Real-time RT-PCR 引物和探针的设计 | 第37-38页 |
| ·ChIFN-γ基因和Ch28S 基因的扩增 | 第38页 |
| ·ChIFN-γ基因序列分析 | 第38页 |
| ·重组体外转录载体的构建与鉴定 | 第38页 |
| ·体外转录模板的鉴定 | 第38页 |
| ·目的基因体外转录的鉴定及转录产物的定量 | 第38-41页 |
| ·标准曲线的绘制 | 第41页 |
| ·讨论 | 第41-43页 |
| 第三章 含禽源启动子的禽流感病毒核蛋白表达载体的构建 | 第43-55页 |
| ·实验材料 | 第44-46页 |
| ·实验动物与鸡胚 | 第44页 |
| ·质粒与菌种 | 第44页 |
| ·细胞系 | 第44页 |
| ·工具酶与试剂 | 第44页 |
| ·主要溶液和培养基的配置 | 第44-46页 |
| ·主要仪器 | 第46页 |
| ·实验方法 | 第46-49页 |
| ·引物设计 | 第46页 |
| ·真核表达质粒pCAGGS-NP 的构建 | 第46-47页 |
| ·鸡胚成纤维细胞的制备 | 第47页 |
| ·重组质粒转染鸡胚成纤维细胞 | 第47页 |
| ·间接免疫荧光检测NP 蛋白的瞬时表达 | 第47-48页 |
| ·Western-blot 检测NP 蛋白的瞬时表达 | 第48页 |
| ·ELISA 检测方法的建立 | 第48页 |
| ·免疫用质粒的制备 | 第48-49页 |
| ·免疫与抗体检测 | 第49页 |
| ·结果 | 第49-53页 |
| ·真核表达质粒pCAGGS-NP 的构建 | 第49-50页 |
| ·间接免疫荧光（IFA）检测pCAGGS-NP 瞬时表达 | 第50页 |
| ·Western-blot 检测pCAGG-NP 瞬时表达 | 第50-52页 |
| ·ELISA 检测方法反应条件的确定 | 第52页 |
| ·血清中NP 抗体的ELISA 检测 | 第52-53页 |
| ·讨论 | 第53-55页 |
| 第四章 H5N1 禽流感病毒核蛋白分节段重组痘病毒的构建 | 第55-67页 |
| ·实验材料 | 第56-57页 |
| ·质粒菌种 | 第56页 |
| ·病毒 | 第56页 |
| ·细胞 | 第56页 |
| ·工具酶与试剂 | 第56-57页 |
| ·主要溶液和培养基的配置 | 第57页 |
| ·实验方法 | 第57-61页 |
| ·引物设计 | 第57-58页 |
| ·鸡胚成纤维细胞的制备 | 第58页 |
| ·分节段NP 重组禽痘病毒转移载体的构建 | 第58页 |
| ·转染质粒的提取 | 第58-60页 |
| ·痘病毒储存样品的准备 | 第60页 |
| ·转染 | 第60页 |
| ·重组禽痘病毒的筛选及纯化 | 第60页 |
| ·重组禽痘病毒的PCR 鉴定 | 第60-61页 |
| ·重组禽痘病毒蛋白表达的检测 | 第61页 |
| ·结果 | 第61-64页 |
| ·分节段NP 重组禽痘病毒转移载体的构建 | 第61页 |
| ·分节段NP 重组禽痘病毒的构建 | 第61-64页 |
| ·重组禽痘病毒的PCR 鉴定 | 第64页 |
| ·重组禽痘病毒的SDS-PAGE 鉴定 | 第64页 |
| ·讨论 | 第64-67页 |
| 第五章 禽流感病毒核蛋白截短表达重组禽痘病毒相关细胞免疫活性的检测 | 第67-77页 |
| ·实验材料 | 第68-69页 |
| ·细胞 | 第68页 |
| ·病毒 | 第68页 |
| ·试剂 | 第68页 |
| ·主要溶液和培养基的配置 | 第68-69页 |
| ·实验方法 | 第69-72页 |
| ·病毒的定量 | 第69-70页 |
| ·DNA 疫苗免疫鸡淋巴细胞的制备及体外刺激 | 第70页 |
| ·刺激后即脾淋巴细胞RNA 的制备及ChIFN-γmRNA 检测 | 第70-71页 |
| ·刺激后细胞上清中ChIFN-γ的检测 | 第71页 |
| ·刺激后CD8~+ T细胞的增殖 | 第71-72页 |
| ·实验结果 | 第72-74页 |
| ·病毒的定量 | 第72-73页 |
| ·细胞RNA 中ChIFN-γ转录情况的检测 | 第73页 |
| ·细胞上清中ChIFN-γ表达情况的检测 | 第73页 |
| ·CD8~+ T细胞的增殖 | 第73-74页 |
| ·讨论 | 第74-77页 |
| 第六章 全文结论 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-97页 |
| 致谢 | 第97-98页 |
| 作者简介 | 第98-99页 |
