杀螟硫磷重组单链抗体研究
| 中文摘要 | 第1-5页 |
| 英文摘要 | 第5-12页 |
| 缩略词 | 第12-13页 |
| 1 绪论 | 第13-37页 |
| ·有机磷农药残留检测技术的研究进展 | 第13-18页 |
| ·样品的前处理技术 | 第13-16页 |
| ·农药残留的仪器检测法 | 第16-17页 |
| ·农药残留的快速检测法 | 第17-18页 |
| ·抗体简介 | 第18-31页 |
| ·抗体的基本结构 | 第18-19页 |
| ·ScFv 基因的构建 | 第19-20页 |
| ·抗体基因库技术 | 第20-27页 |
| ·单链抗体的表达 | 第27-29页 |
| ·抗体的纯化 | 第29页 |
| ·ScFv 存在问题及改进方法 | 第29-31页 |
| ·立题依据 | 第31-33页 |
| ·本研究的目标和内容 | 第33-34页 |
| ·整体设计思路 | 第34-35页 |
| ·创新之处 | 第35-37页 |
| 2 杀螟硫磷抗原合成与鉴定 | 第37-43页 |
| ·技术路线 | 第37页 |
| ·实验材料 | 第37页 |
| ·主要仪器 | 第37页 |
| ·主要试剂 | 第37页 |
| ·实验方法 | 第37-39页 |
| ·杀螟硫磷半抗原的合成 | 第37-38页 |
| ·杀螟硫磷半抗原的纯化 | 第38页 |
| ·杀螟硫磷抗原的合成 | 第38-39页 |
| ·结果与分析 | 第39-41页 |
| ·人工抗原的合成与鉴定 | 第39-40页 |
| ·小分子与载体蛋白结合比的测定 | 第40-41页 |
| ·讨论 | 第41-43页 |
| ·半抗原的设计与合成 | 第41-42页 |
| ·载体的选择 | 第42页 |
| ·人工抗原的合成 | 第42-43页 |
| 3 单链抗体文库的构建 | 第43-63页 |
| ·技术路线 | 第43页 |
| ·实验材料 | 第43-45页 |
| ·主要仪器 | 第43-44页 |
| ·主要试剂 | 第44-45页 |
| ·实验方法 | 第45-52页 |
| ·免疫小鼠 | 第45-46页 |
| ·小鼠抗血清效价的测定 | 第46页 |
| ·分离小鼠脾细胞 | 第46-47页 |
| ·脾细胞总 RNA 的提取 | 第47页 |
| ·VH、VL 的扩增 | 第47-50页 |
| ·ScFv 文库质量的评价 | 第50-52页 |
| ·结果与分析 | 第52-58页 |
| ·小鼠免疫 | 第52页 |
| ·脾细胞RNA 质量测定 | 第52-53页 |
| ·RT-PCR 扩增VH 和VL | 第53-54页 |
| ·VH 与 VL 片段的连接 | 第54-55页 |
| ·单链抗体文库质量评价 | 第55-58页 |
| ·讨论 | 第58-63页 |
| ·免疫小鼠 | 第58页 |
| ·总 RNA 的提取 | 第58-59页 |
| ·ScFv 文库重链和轻链的扩增 | 第59-60页 |
| ·重链与轻链的连接 | 第60-63页 |
| 4 核糖体展示 | 第63-71页 |
| ·技术路线 | 第63页 |
| ·实验材料 | 第63-64页 |
| ·主要仪器 | 第63页 |
| ·主要试剂 | 第63-64页 |
| ·实验方法 | 第64-65页 |
| ·体外转录/翻译 | 第64页 |
| ·亲和筛选 | 第64-65页 |
| ·结果与分析 | 第65-67页 |
| ·体外无细胞翻译系统 | 第65-66页 |
| ·RT-PCR 扩增 | 第66-67页 |
| ·讨论 | 第67-71页 |
| ·体外转录与翻译 | 第67-68页 |
| ·亲和筛选 | 第68-69页 |
| ·RT-PCR 扩增 | 第69-71页 |
| 5 单链抗体的克隆及筛选 | 第71-87页 |
| ·技术路线 | 第71页 |
| ·实验材料 | 第71-72页 |
| ·主要仪器 | 第71页 |
| ·主要试剂 | 第71-72页 |
| ·实验方法 | 第72-77页 |
| ·筛选后单链抗体库DNA 的扩增 | 第72-73页 |
| ·全套ScFv 基因的克隆 | 第73-75页 |
| ·ScFv 的表达 | 第75页 |
| ·ELISA 筛选单链抗体 | 第75页 |
| ·Biacore 筛选高亲和力单链抗体 | 第75-77页 |
| ·结果与分析 | 第77-83页 |
| ·阳性克隆子的验证 | 第77-78页 |
| ·单链抗体的表达 | 第78页 |
| ·筛选阳性克隆子 | 第78-80页 |
| ·Biacore 筛选高亲和力抗体 | 第80-83页 |
| ·讨论 | 第83-87页 |
| ·ELISA 初筛抗原阳性单链抗体 | 第83-84页 |
| ·Biacore 筛选高亲和力ScFv | 第84-87页 |
| 6 单链抗体的表达及特性研究 | 第87-99页 |
| ·技术路线 | 第87页 |
| ·实验材料 | 第87-89页 |
| ·主要仪器 | 第87-88页 |
| ·主要试剂 | 第88-89页 |
| ·实验方法 | 第89-91页 |
| ·ScFv 表达产物的纯化 | 第89-90页 |
| ·SDS-PAGE 电泳分析表达蛋白 | 第90页 |
| ·ELISA 测定单链抗体亲和力和专一性 | 第90-91页 |
| ·单链抗体亲和力测定 | 第91页 |
| ·序列测定及分析 | 第91页 |
| ·结果与分析 | 第91-96页 |
| ·单链抗体的纯化 | 第91-92页 |
| ·ELISA 分析单链抗体专一性 | 第92-93页 |
| ·Biacore 系统分析单链抗体亲和力 | 第93-95页 |
| ·单链抗体序列分析 | 第95-96页 |
| ·讨论 | 第96-99页 |
| ·单链抗体表达与纯化 | 第96-97页 |
| ·抗体特性研究及序列分析 | 第97-99页 |
| 7 样本添加回收率测定 | 第99-103页 |
| ·技术路线 | 第99页 |
| ·实验材料 | 第99页 |
| ·主要仪器 | 第99页 |
| ·主要试剂 | 第99页 |
| ·实验方法 | 第99-100页 |
| ·结果与分析 | 第100-101页 |
| ·讨论 | 第101-103页 |
| 8 主要研究结论及后续研究建议 | 第103-105页 |
| ·主要研究结论 | 第103-104页 |
| ·后续工作建议 | 第104-105页 |
| 致谢 | 第105-107页 |
| 参考文献 | 第107-117页 |
| 附录 | 第117页 |
