| 中文摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-6页 |
| 本论文中常用英文缩写词汇含义说明 | 第6-11页 |
| 第一部分 文献综述 | 第11-16页 |
| 第一章 疱疹病毒UL31基因及其编码蛋白研究进展 | 第11-16页 |
| 1.疱疹病毒UL31基因特点 | 第11-12页 |
| 2.UL31蛋白的定位 | 第12页 |
| 3.UL31和UL34基因的关系 | 第12-13页 |
| 4.UL31蛋白的功能 | 第13-15页 |
| ·UL31蛋白在病毒复制中的作用 | 第13-14页 |
| ·UL31蛋白在病毒包装中的作用 | 第14页 |
| ·UL31蛋白在病毒出芽中的作用 | 第14-15页 |
| 5 展望 | 第15-16页 |
| 第二部分 实验研究 | 第16-70页 |
| 第二章 鸭瘟病毒UL31基因的克隆及分子特征分析 | 第16-29页 |
| 1 材料与方法 | 第16-17页 |
| ·毒株、菌株及载体 | 第16页 |
| ·主要试剂及配制 | 第16-17页 |
| 2 实验方法 | 第17-21页 |
| ·DPV UL31基因的克隆 | 第17-19页 |
| ·引物设计 | 第17页 |
| ·鸭胚成千维细胞的制备 | 第17-18页 |
| ·病毒基因组DNA的提取 | 第18页 |
| ·DPV UL31基因的PCR扩增 | 第18-19页 |
| ·UL31基因的T-载体克隆及鉴定 | 第19页 |
| ·UL31基因的T-载体克隆 | 第19页 |
| ·重组质粒pMD18-UL31的鉴定 | 第19页 |
| ·斑点杂交检测DPV UL31基因 | 第19-20页 |
| ·探针的设计 | 第19页 |
| ·核酸探针特异性检测 | 第19页 |
| ·斑点杂交步骤 | 第19-20页 |
| ·生物信息学分析 | 第20-21页 |
| ·核酸序列分析 | 第20页 |
| ·蛋白质序列的生物信息学分析 | 第20-21页 |
| ·抗原性分析 | 第21页 |
| 3 结果 | 第21-27页 |
| ·鸭瘟病毒UL31基因的扩增 | 第21-22页 |
| ·UL31基因的T-克隆与鉴定 | 第22页 |
| ·斑点杂交实验 | 第22-23页 |
| ·核苷酸序列特征分析 | 第23页 |
| ·氨基酸序列特征分析 | 第23-24页 |
| ·进化树分析 | 第24-26页 |
| ·抗原性预测 | 第26-27页 |
| 4 讨论 | 第27-29页 |
| 第三章 鸭瘟病毒UL31基因原核表达及多克隆抗体的制备 | 第29-43页 |
| 1 材料 | 第29-31页 |
| ·菌株及表达载体 | 第29页 |
| ·实验动物 | 第29页 |
| ·主要试剂及配制 | 第29-30页 |
| ·主要仪器 | 第30-31页 |
| 2 方法 | 第31-38页 |
| ·质粒pMD18-UL31的提取 | 第31-32页 |
| ·质粒pMD18-UL31的酶切与回收 | 第32-33页 |
| ·质粒pET32a(+)的提取、酶切与回收 | 第33页 |
| ·pMD18-UL31与pET32a(+)载体酶切片段的连接 | 第33页 |
| ·重组质粒的转化 | 第33-34页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第34-35页 |
| ·重组蛋白的诱导表达及条件优化 | 第35-36页 |
| ·兔高免血清的制备 | 第36-38页 |
| 3 结果 | 第38-41页 |
| ·重组表达质粒pET32-UL31的构建 | 第38页 |
| ·重组蛋白在大肠杆菌中的表达及条件优化 | 第38-41页 |
| 4 讨论 | 第41-43页 |
| ·外源蛋白的表达 | 第41-42页 |
| ·多克隆抗体的制备 | 第42-43页 |
| 第四章 DPV体外感染宿主细胞UL31基因转录时相分析 | 第43-53页 |
| 1 材料与试剂 | 第43页 |
| ·材料 | 第43页 |
| ·主要试剂 | 第43页 |
| ·主要仪器 | 第43页 |
| 2 实验方法 | 第43-45页 |
| ·引物的设计与合成 | 第43-44页 |
| ·鸭胚成纤维细胞的制备与病毒感染 | 第44页 |
| ·总RNA的提取 | 第44页 |
| ·逆转录 | 第44-45页 |
| ·DPV UL31 SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法的建立 | 第45页 |
| 3 结果 | 第45-51页 |
| ·引物设计 | 第45-46页 |
| ·RNA完整性及纯度分析 | 第46页 |
| ·SYBR Green Ⅰ real-time PCR反应条件优化结果 | 第46-48页 |
| ·SYBR Green real-time PCR标准曲线的建立及线形范围 | 第48-50页 |
| ·SYBR Green real-time PCR检测UL31基因在感染宿主细胞中的转录时相 | 第50-51页 |
| 4 讨论 | 第51-53页 |
| ·转录时相的研究方法 | 第51-52页 |
| ·标准曲线的分析 | 第52页 |
| ·UL31基因转录时相分析 | 第52-53页 |
| 第五章 鸭瘟病毒UL31基因产物在感染宿主细胞的细胞定位分析 | 第53-61页 |
| 1 材料 | 第53-54页 |
| ·毒株及鸭胚 | 第53页 |
| ·主要试剂及配制 | 第53-54页 |
| ·主要仪器 | 第54页 |
| 2 实验方法 | 第54-55页 |
| ·间接免疫荧光检测DPV UL31基因产物细胞定位方法的建立及优化 | 第54-55页 |
| ·DPV UL31基因产物细胞定位的动态监测 | 第55页 |
| 3 结果 | 第55-59页 |
| ·间接免疫荧光检测DPV UL31基因产物细胞定位方法的建立及优化 | 第55-57页 |
| ·DPV UL31基因产物细胞定位的动态监测 | 第57-59页 |
| 4 讨论 | 第59-61页 |
| ·关于蛋白定位研究的方法 | 第59页 |
| ·鸭瘟病毒UL31基因在感染宿主细胞的定位分析 | 第59-61页 |
| 第六章 鸭瘟病毒UL31基因产物在人工感染鸭组织定位分布 | 第61-70页 |
| 1 材料 | 第61-62页 |
| ·毒株 | 第61页 |
| ·实验动物 | 第61页 |
| ·实验试剂 | 第61-62页 |
| 2 实验方法 | 第62-64页 |
| ·人工感染动物试验 | 第62页 |
| ·间接免疫荧光检测DPV UL31基因产物方法的建立及优化 | 第62-64页 |
| 3 结果 | 第64-67页 |
| ·人工感染鸭发病的临床发状和病理变化 | 第64页 |
| ·间接免疫荧光检测DPV UL31基因产物在鸭组织的定位 | 第64-67页 |
| 4 讨论 | 第67-70页 |
| 第三部分 结论 | 第70-71页 |
| 第四部分 参考文献 | 第71-77页 |
| 致谢 | 第77页 |
