| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-10页 |
| 第1章 引言 | 第10-18页 |
| ·Pokemon 与肿瘤 | 第10-12页 |
| ·胰岛素信号通路简介 | 第12-15页 |
| ·Cyclin D3 简介 | 第15-16页 |
| ·硕士论文主要工作 | 第16-18页 |
| ·在肝癌细胞中胰岛素调控Pokemon 的表达 | 第17页 |
| ·探究胰岛素调控Pokemon 的机理 | 第17页 |
| ·Cyclin D3 各个长度启动子报告基因质粒的构建 | 第17页 |
| ·Pokemon 对Cyclin D3 的调控作用及机理研究 | 第17-18页 |
| 第2章 胰岛素调控Pokemon 表达的机理研究 | 第18-37页 |
| ·本章引论 | 第18页 |
| ·实验材料 | 第18-23页 |
| ·质粒 | 第18-20页 |
| ·细胞 | 第20页 |
| ·主要试剂 | 第20-21页 |
| ·溶液配制 | 第21-22页 |
| ·主要仪器 | 第22-23页 |
| ·实验方法 | 第23-27页 |
| ·细胞培养 | 第23页 |
| ·细胞总RNA 的提取和cDNA 的制备 | 第23-24页 |
| ·Real-time PCR | 第24页 |
| ·细胞总蛋白的提取及定量 | 第24-25页 |
| ·Western Blot 实验方法 | 第25-26页 |
| ·超纯质粒转染哺乳动物细胞 | 第26-27页 |
| ·双荧光素酶报告基因检测方法 | 第27页 |
| ·实验结果 | 第27-36页 |
| ·胰岛素可以上调Pokemon 的表达并且具有剂量依赖性 | 第27-29页 |
| ·胰岛素调控Pokemon 的表达具有时间依赖性 | 第29-31页 |
| ·胰岛素通过PI3K/AKT 信号通路调控Pokemon 的表达 | 第31-33页 |
| ·胰岛素可以激活Pokemon 的启动子活性 | 第33-34页 |
| ·胰岛素可能通过转录因子Sp1 对Pokemon 的启动子进行调控 | 第34-36页 |
| ·讨论 | 第36-37页 |
| 第3章 构建Cyclin D3 启动子报告基因质粒 | 第37-46页 |
| ·本章引论 | 第37页 |
| ·实验材料 | 第37-39页 |
| ·细胞 | 第37页 |
| ·菌种 | 第37页 |
| ·主要试剂 | 第37-38页 |
| ·溶液配制 | 第38页 |
| ·主要仪器 | 第38-39页 |
| ·实验方法 | 第39-43页 |
| ·基因组DNA 的提取 | 第39页 |
| ·Cyclin D3 各启动子片段的克隆和纯化 | 第39-40页 |
| ·DNA 的酶切和连接 | 第40页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备和转化 | 第40-41页 |
| ·小提质粒 | 第41页 |
| ·酶切鉴定 | 第41页 |
| ·用于哺乳动物细胞转染的超纯质粒的制备 | 第41-42页 |
| ·各启动子报告基因活性检测 | 第42-43页 |
| ·实验结果 | 第43-45页 |
| ·获得4 个不同长度启动子报告基因质粒 | 第43-44页 |
| ·各启动子报告基因质粒的活性检测 | 第44-45页 |
| ·讨论 | 第45-46页 |
| 第4章 Pokemon 调控 Cyclin D3 及其机理探讨 | 第46-59页 |
| ·本章引论 | 第46页 |
| ·实验材料 | 第46-47页 |
| ·质粒 | 第46页 |
| ·主要试剂 | 第46-47页 |
| ·溶液配制 | 第47页 |
| ·主要仪器 | 第47页 |
| ·实验方法 | 第47-51页 |
| ·Real-time PCR 检测Cyclin D3 的mRNA 水平 | 第47-48页 |
| ·双荧光素酶法检测Pokemon 对Cyclin D3 的启动子调控作用 | 第48页 |
| ·用siRNA 转染哺乳动物细胞 | 第48页 |
| ·反转录PCR 检测基因沉默效果 | 第48页 |
| ·CHIP 检测Sp1 与Pokemon 启动子GC-Box 的结合 | 第48-50页 |
| ·突变质粒的构建 | 第50-51页 |
| ·实验结果 | 第51-58页 |
| ·Pokemon 下调Cyclin D3 的m RNA 水平 | 第51-52页 |
| ·Pokemon 下调Cyclin D3 的启动子活性 | 第52-53页 |
| ·沉默Pokemon 上调Cyclin D3 的启动子活性 | 第53-54页 |
| ·CHIP 实验证明Pokemon 可以直接结合于Cyclin D3 启动子 | 第54-55页 |
| ·Cyclin D3 突变启动子的构建及在细胞内活性 | 第55-56页 |
| ·Pokemon 不能调控Cyclin D3 突变启动子M2 活性 | 第56-57页 |
| ·Co-CHIP 检测HDAC1 是否结合于Cyclin D3 启动子内 | 第57-58页 |
| ·讨论 | 第58-59页 |
| 第5章 结论与讨论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第68页 |
