| 摘要 | 第1-15页 |
| Abstract | 第15-19页 |
| 缩略语表 | 第19-20页 |
| 第一部分 文献综述 | 第20-40页 |
| 第一章 卵泡发育调节机制研究进展 | 第20-40页 |
| 1 生长因子调控卵泡发育的机制研究进展 | 第20-27页 |
| ·转化生长因子β超家族成员(TGF-β) | 第20-26页 |
| ·GDF9和BMP15基因 | 第21-24页 |
| ·INH基因 | 第24-26页 |
| ·生长抑素(SS) | 第26-27页 |
| 2 表观遗传学研究进展 | 第27-34页 |
| ·表观修饰的调节机制 | 第27-30页 |
| ·相关酶类的功能 | 第27-29页 |
| ·抑制剂的修饰作用 | 第29-30页 |
| ·表观遗传调控基因表达的机制 | 第30-33页 |
| ·DNA甲基化对基因表达的调控 | 第30-31页 |
| ·组蛋白乙酰化对基因表达的调控 | 第31-32页 |
| ·组蛋白其他修饰对基因表达的调控 | 第32-33页 |
| ·方法学研究进展 | 第33-34页 |
| ·整体表观修饰检测方法 | 第33页 |
| ·DNA甲基化检测方法 | 第33-34页 |
| ·染色质免疫共沉淀技术 | 第34页 |
| 3 配子发生和卵泡发育过程中的表观遗传修饰 | 第34-38页 |
| ·配子发生和卵泡发育过程中的表观遗传现象 | 第35-36页 |
| ·DNA甲基化与基因印记现象 | 第35页 |
| ·组蛋白乙酰化与染色质重构 | 第35-36页 |
| ·非编码RNA | 第36页 |
| ·表观遗传修饰异常引发的问题 | 第36页 |
| ·表观修饰酶类的表达变化 | 第36-37页 |
| ·表观修饰对卵泡发育相关基因的调控 | 第37-38页 |
| ·DNA甲基化调控基因表达 | 第37页 |
| ·组蛋白修饰调控基因表达 | 第37-38页 |
| 4 目的与意义 | 第38-40页 |
| 第二部分 实验研究 | 第40-115页 |
| 第二章 表观遗传修饰对牛卵泡发育的调控作用研究 | 第40-56页 |
| 1 引言 | 第40页 |
| 2 材料与方法 | 第40-45页 |
| ·实验材料 | 第40-42页 |
| ·实验动物 | 第40-41页 |
| ·实验试剂 | 第41页 |
| ·主要仪器 | 第41-42页 |
| ·实验方法 | 第42-45页 |
| ·牛卵泡的分级 | 第42页 |
| ·卵母细胞和颗粒细胞(GCs)的分离、培养 | 第42页 |
| ·甲基化转移酶及去乙酰化酶抑制剂处理卵母细胞和颗粒细胞 | 第42-43页 |
| ·荧光定量PCR分析 | 第43-45页 |
| ·统计分析 | 第45页 |
| 3 结果 | 第45-53页 |
| ·COCs细胞总RNA质量 | 第45页 |
| ·表观修饰相关酶类在不同发育阶段卵泡的表达水平 | 第45-49页 |
| ·甲基化转移酶类(DNMTs)的表达变化 | 第46页 |
| ·去乙酰化酶类(HDACs)及乙酰化转移酶HAT1的转录水平 | 第46-49页 |
| ·抑制剂处理后颗粒细胞形态变化和卵母细胞成熟率 | 第49-50页 |
| ·抑制剂处理后颗粒细胞形态变化 | 第49页 |
| ·抑制剂处理后卵母细胞成熟率 | 第49-50页 |
| ·抑制剂处理后表观修饰相关酶类的表达变化 | 第50-53页 |
| ·抑制剂处理后DNMTs的表达变化 | 第50-52页 |
| ·抑制剂处理后HDACs及HAT1的表达变化 | 第52-53页 |
| 4 讨论 | 第53-55页 |
| ·酶类介导的表观遗传修饰参与调节卵泡的发育 | 第53-54页 |
| ·由DNMTs介导的DNA甲基化作用参与调节牛卵泡发育 | 第53-54页 |
| ·HDACs和HATs介导的组蛋白乙酰化作用调控牛卵泡发育 | 第54页 |
| ·抑制剂5-aza-dc和NaB对GCs及卵母细胞的作用 | 第54-55页 |
| ·抑制剂5-aza-dc和NaB改变GCs形态 | 第54页 |
| ·抑制剂5-aza-dc和NaB提高卵母细胞的成熟率 | 第54-55页 |
| ·抑制剂5-aza-dc和NaB下调DNMTs、HDACs及HAT1的表达 | 第55页 |
| 5 小结 | 第55-56页 |
| 第三章 GDF9和BMP15对牛卵泡发育的调控作用研究 | 第56-65页 |
| 1 引言 | 第56-57页 |
| 2 材料与方法 | 第57-60页 |
| ·实验材料 | 第57页 |
| ·实验动物 | 第57页 |
| ·实验试剂 | 第57页 |
| ·主要仪器 | 第57页 |
| ·实验方法 | 第57-59页 |
| ·牛卵泡分级 | 第57页 |
| ·甲基化转移酶及去乙酰化酶抑制剂处理卵母细胞 | 第57-58页 |
| ·荧光定量PCR分析 | 第58页 |
| ·West-blot检测 | 第58-59页 |
| ·统计分析 | 第59-60页 |
| 3 结果 | 第60-63页 |
| ·GDF9和BMP15基因在卵泡不同发育时期的转录水平 | 第60-61页 |
| ·GDF9和BMP15基因在卵泡不同发育时期的蛋白水平 | 第61-62页 |
| ·抑制剂处理后GDF9和BMP15基因的表达变化 | 第62-63页 |
| 4 讨论 | 第63-64页 |
| ·GDF9和BMP15在卵泡发育过程中呈差异转录 | 第63页 |
| ·GDF9和BMP15在卵泡发育过程中呈差异表达 | 第63页 |
| ·抑制剂5-aza-dc和NaB上调GDF9和BMP15基因的表达 | 第63-64页 |
| 5 小结 | 第64-65页 |
| 第四章 INHα对黄牛卵泡发育的调控机制研究 | 第65-103页 |
| 1 引言 | 第65-66页 |
| 2 材料与方法 | 第66-80页 |
| ·实验材料 | 第66-68页 |
| ·细胞 | 第66-67页 |
| ·菌株和载体 | 第67页 |
| ·各种酶类及试剂盒 | 第67-68页 |
| ·主要仪器 | 第68页 |
| ·实验方法 | 第68-80页 |
| ·INHα基因的表达变化分析 | 第68页 |
| ·抑制剂处理颗粒细胞 | 第68页 |
| ·牛INHα核心启动子预测 | 第68-69页 |
| ·牛INHα启动子载体构建 | 第69-73页 |
| ·启动子质粒的大量制备 | 第73页 |
| ·质粒的酶切鉴定及测序 | 第73页 |
| ·细胞转染 | 第73-74页 |
| ·抑制剂处理后INHα启动子活性的检测 | 第74页 |
| ·双荧光素酶活性测定 | 第74页 |
| ·染色质免疫共沉淀 | 第74-77页 |
| ·亚硫酸氢盐修饰基因组DNA | 第77-78页 |
| ·巢式PCR扩增目的片段 | 第78-79页 |
| ·目的片段与T载体连接,转化 | 第79-80页 |
| ·阳性克隆测序 | 第80页 |
| ·甲基化结果分析 | 第80页 |
| ·统计分析 | 第80页 |
| 3 结果 | 第80-96页 |
| ·INHα在卵泡发育不同时期的表达变化 | 第80-82页 |
| ·INHα的转录水平 | 第80-81页 |
| ·INHα的蛋白水平 | 第81-82页 |
| ·抑制剂5-aza-dc和NaB处理后INHα基因的表达变化 | 第82-83页 |
| ·INHα核心启动子筛选 | 第83-86页 |
| ·INHα启动子的生物信息学分析 | 第83-85页 |
| ·5种INHα缺失启动子载体构建 | 第85页 |
| ·筛选核心启动子 | 第85-86页 |
| ·INHα启动子区P300和AP2α转录因子结合位点检测 | 第86-87页 |
| ·DNA甲基化和组蛋白乙酰化修饰INHα启动子的机制 | 第87-89页 |
| ·抑制剂5-aza-dc和NaB处理对INHα启动子活性的影响 | 第87-88页 |
| ·DNA甲基化对INHα启动子的修饰 | 第88页 |
| ·抑制剂对组蛋白H3乙酰化水平的影响 | 第88-89页 |
| ·P300和AP2α转录因子调控INHα启动子的机制 | 第89-92页 |
| ·抑制剂对P300和AP2α结合率的影响 | 第89-90页 |
| ·P300结合位点突变对INHα启动子活性的影响 | 第90-91页 |
| ·P300结合位点突变对其结合率的影响 | 第91-92页 |
| ·P300结合位点突变对组蛋白H3乙酰化水平的影响 | 第92页 |
| ·不同级别卵泡INHα核心启动子CpG岛的DNA甲基化状态 | 第92-96页 |
| ·COCs细胞DNA质量 | 第92-93页 |
| ·INHα启动子区CpG岛的相关信息 | 第93-94页 |
| ·巢式PCR结果 | 第94页 |
| ·各级卵泡INHα启动子区CpG岛的甲基化状态 | 第94-96页 |
| ·启动子CpG岛甲基化水平同INHα基因表达的相关性 | 第96页 |
| 4 讨论 | 第96-102页 |
| ·INHα在卵泡发育过程中是差异表达的 | 第96-97页 |
| ·抑制剂5-aza-dc和NaB上调INHα基因的表达 | 第97页 |
| ·INHα启动子研究的必要性 | 第97页 |
| ·INHα启动子相关信息解析 | 第97-98页 |
| ·DNA甲基化和组蛋白乙酰化作用调控启动子介导的INHα基因的转录 | 第98-99页 |
| ·DNA甲基化作用下调启动子活性抑制INHα基因表达 | 第98-99页 |
| ·组蛋白乙酰化修饰激活启动子活性增强INHα基因表达 | 第99页 |
| ·表观修饰调控INHα启动子-345--197和-907--804区段的机制 | 第99-101页 |
| ·AP2α转录因子参与DNA甲基化对INHα启动子的修饰 | 第99-100页 |
| ·P300转录因子调控INHα启动子的潜在机制解析 | 第100-101页 |
| ·重亚硫酸氢盐测序法分析甲基化状态的优点 | 第101页 |
| ·启动子CpG岛甲基化水平不影响INHα基因的表达 | 第101-102页 |
| 5 小结 | 第102-103页 |
| 第五章 SS对卵泡发育的调控作用研究 | 第103-115页 |
| 1 引言 | 第103-104页 |
| 2 材料与方法 | 第104-107页 |
| ·实验材料 | 第104页 |
| ·实验对象 | 第104页 |
| ·实验试剂 | 第104页 |
| ·主要仪器 | 第104页 |
| ·实验方法 | 第104-107页 |
| ·免疫用pGM-CSF/SS疫苗的制备 | 第104-105页 |
| ·小鼠免疫 | 第105页 |
| ·抗体水平测定 | 第105页 |
| ·雌鼠繁殖性能测定 | 第105页 |
| ·激素水平测定 | 第105页 |
| ·质粒的大量制备 | 第105-106页 |
| ·细胞转染 | 第106页 |
| ·颗粒细胞转染后SS片段检测 | 第106-107页 |
| ·颗粒细胞凋亡基因的检测 | 第107页 |
| ·颗粒细胞凋亡的检测 | 第107页 |
| ·统计方法 | 第107页 |
| 3 结果 | 第107-112页 |
| ·SS疫苗免疫后的抗体水平 | 第107-109页 |
| ·SS疫苗免疫后的繁殖性能 | 第109页 |
| ·SS疫苗免疫后的激素水平 | 第109-110页 |
| ·目的基因SS的表达 | 第110页 |
| ·SS对GCs凋亡的影响 | 第110-111页 |
| ·SS对凋亡相关基因的影响 | 第111-112页 |
| ·SS对GCs中激素水平的影响 | 第112页 |
| 4 讨论 | 第112-114页 |
| ·SS疫苗可改善雌鼠的生殖性能 | 第112-113页 |
| ·SS调控颗粒细胞的发育 | 第113-114页 |
| 5 小结 | 第114-115页 |
| 第三部分 全文结论和创新点 | 第115-118页 |
| 1 全文结论 | 第115-117页 |
| 2 创新点 | 第117-118页 |
| 第四部分 参考文献 | 第118-136页 |
| 附录 | 第136-137页 |
| 1 在读期间发表论文 | 第136页 |
| 2 参与完成的项目 | 第136-137页 |
| 致谢 | 第137-138页 |
