| 摘要 | 第6-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 英文缩略表 | 第14-15页 |
| 第一章 引言 | 第15-24页 |
| 1.1 角蛋白 | 第15-16页 |
| 1.1.1 角蛋白组成与结构 | 第15页 |
| 1.1.2 角蛋白利用 | 第15-16页 |
| 1.2 角蛋白降解关键酶 | 第16-17页 |
| 1.2.1 角蛋白酶 | 第16页 |
| 1.2.2 二硫键还原酶 | 第16-17页 |
| 1.3 传统微生物诱变育种 | 第17-18页 |
| 1.3.1 紫外诱变 | 第17页 |
| 1.3.2 化学诱变 | 第17-18页 |
| 1.3.3 筛选方法 | 第18页 |
| 1.4 枯草芽孢杆菌表达系统 | 第18-19页 |
| 1.4.1 枯草芽孢杆菌表达系统研究现状 | 第18-19页 |
| 1.5 影响外源蛋白在枯草芽孢杆菌分泌表达关键因素 | 第19-21页 |
| 1.5.1 启动子选择 | 第19-20页 |
| 1.5.2 高效信号肽筛选 | 第20页 |
| 1.5.3 前导肽改造 | 第20-21页 |
| 1.5.4 制备缺陷型宿主菌 | 第21页 |
| 1.5.5 构建枯草芽孢杆菌-大肠杆菌穿梭系统 | 第21页 |
| 1.5.6 提高载体与感受态转化效率 | 第21页 |
| 1.6 研究目的与意义 | 第21-23页 |
| 1.7 技术路线 | 第23-24页 |
| 第二章 地衣芽孢杆菌CP-16 诱变选育 | 第24-30页 |
| 2.1 材料与方法 | 第24-26页 |
| 2.1.1 菌种 | 第24页 |
| 2.1.2 培养基和主要化学试剂的配制 | 第24页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第24页 |
| 2.1.4 菌株复苏和种子液制备 | 第24页 |
| 2.1.5 地衣芽孢杆菌CP-16 紫外诱变 | 第24-25页 |
| 2.1.6 地衣芽孢杆菌CP-16 化学诱变 | 第25页 |
| 2.1.7 初筛 | 第25页 |
| 2.1.8 复筛 | 第25页 |
| 2.1.9 致死率计算 | 第25-26页 |
| 2.2 结果与分析 | 第26-28页 |
| 2.2.1 紫外线对菌株的诱变效应 | 第26页 |
| 2.2.2 紫外诱变的初筛与复筛 | 第26-27页 |
| 2.2.3 硫酸二乙酯对菌株的诱变效应 | 第27页 |
| 2.2.4 硫酸二乙酯诱变的初筛与复筛 | 第27-28页 |
| 2.3 讨论 | 第28-29页 |
| 2.4 小结 | 第29-30页 |
| 第三章 CP-16 羽毛降解关键基因枯草芽孢杆菌中的表达 | 第30-39页 |
| 3.1 材料与方法 | 第30-34页 |
| 3.1.1 菌株和载体 | 第30页 |
| 3.1.2 工具酶和试剂 | 第30页 |
| 3.1.3 培养基和主要化学试剂的配制 | 第30-31页 |
| 3.1.4 主要仪器设备 | 第31页 |
| 3.1.5 降解羽毛关键酶基因序列的克隆 | 第31-33页 |
| 3.1.6 大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第33页 |
| 3.1.7 菌液PCR与基因测序 | 第33页 |
| 3.1.8 重组质粒的小量提取及酶切鉴定 | 第33页 |
| 3.1.9 枯草芽孢杆菌WB600 电转感受态细胞的制备与转化 | 第33-34页 |
| 3.1.10 菌液PCR与基因测序 | 第34页 |
| 3.1.11 酶活测定 | 第34页 |
| 3.2 结果与分析 | 第34-37页 |
| 3.2.1 CP-16 基因组DNA提取 | 第34-35页 |
| 3.2.2 降解羽毛关键酶基因的克隆 | 第35页 |
| 3.2.3 表达载体的构建 | 第35-36页 |
| 3.2.4 重组菌株的表达 | 第36-37页 |
| 3.3 讨论 | 第37-38页 |
| 3.4 小结 | 第38-39页 |
| 第四章 降解羽毛关键基因高效信号肽筛选 | 第39-49页 |
| 4.1 材料与方法 | 第39-43页 |
| 4.1.1 菌株和载体 | 第39页 |
| 4.1.2 不同信号肽降解羽毛关键酶基因序列的克隆 | 第39-43页 |
| 4.1.3 大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第43页 |
| 4.1.4 菌液PCR与基因测序 | 第43页 |
| 4.1.5 枯草芽孢杆菌WB600 电转感受态细胞的制备与转化 | 第43页 |
| 4.1.6 菌液PCR与基因测序 | 第43页 |
| 4.1.7 酶活测定 | 第43页 |
| 4.2 结果与分析 | 第43-47页 |
| 4.2.1 无信号肽角蛋白酶基因的克隆 | 第43页 |
| 4.2.2 无信号肽角蛋白酶基因重组枯草芽孢杆菌的表达分析 | 第43-44页 |
| 4.2.3 含有不同信号肽二硫键还原酶、角蛋白酶基因的克隆 | 第44页 |
| 4.2.4 含有不同信号肽二硫键还原酶、角蛋白酶基因重组表达分析 | 第44-47页 |
| 4.2.5 二硫键还原酶、角蛋白酶酶活性的测定 | 第47页 |
| 4.3 讨论 | 第47-48页 |
| 4.4 小结 | 第48-49页 |
| 第五章 重组菌发酵条件优化 | 第49-63页 |
| 5.1 材料与方法 | 第49-53页 |
| 5.1.1 菌种 | 第49页 |
| 5.1.2 种子液制备 | 第49页 |
| 5.1.3 诱导时机对重组菌产酶影响 | 第49页 |
| 5.1.4 重组菌碳源优化 | 第49-50页 |
| 5.1.5 不同碳源组合对重组菌产酶的影响 | 第50页 |
| 5.1.6 重组菌氮源优化 | 第50页 |
| 5.1.7 不同氮源组合对重组菌产酶的影响 | 第50-51页 |
| 5.1.8 发酵时间对重组菌产酶的影响 | 第51页 |
| 5.1.9 正交试验优化培养配方 | 第51-53页 |
| 5.2 结果与分析 | 第53-61页 |
| 5.2.1 诱导时机对重组菌产酶影响 | 第53-54页 |
| 5.2.2 重组菌碳源优化 | 第54页 |
| 5.2.3 不同碳源组合对重组菌产酶的影响 | 第54-55页 |
| 5.2.4 不同碳源组合添加对重组菌产酶影响正交试验验证 | 第55-56页 |
| 5.2.5 重组菌氮源优化 | 第56-57页 |
| 5.2.6 不同氮源组合添加对重组菌产酶影响 | 第57-58页 |
| 5.2.7 不同氮源组合添加对重组菌产酶影响正交试验验证 | 第58-59页 |
| 5.2.8 发酵时间对重组菌产酶的影响 | 第59页 |
| 5.2.9 正交试验优化培养配方 | 第59-60页 |
| 5.2.10 正交试验优化培养配方结果验证 | 第60-61页 |
| 5.3 讨论 | 第61-62页 |
| 5.4 小结 | 第62-63页 |
| 第六章 全文结论 | 第63-64页 |
| 6.1 主要结论 | 第63页 |
| 6.2 创新点 | 第63页 |
| 6.3 有待进一步解决的问题 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-70页 |
| 附录 | 第70-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 作者简历 | 第82页 |
