| 致谢 | 第5-7页 |
| 中文摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 缩略词清单 | 第11-17页 |
| 第1章 引言 | 第17-50页 |
| 1.1 LIS1的研究概况 | 第17-25页 |
| 1.1.1 LIS1与无脑回疾病的关系 | 第17-18页 |
| 1.1.2 LIS1的蛋白结构及其相关生理功能 | 第18-23页 |
| 1.1.3 LIS1与肿瘤发生的关系 | 第23-25页 |
| 1.2 小鼠肺的研究概况 | 第25-34页 |
| 1.2.1 小鼠呼吸系统及其相关结构 | 第25-27页 |
| 1.2.2 小鼠肺的发育过程 | 第27-28页 |
| 1.2.3 小鼠肺发育过程中的信号调控 | 第28-32页 |
| 1.2.4 小鼠肺发育过程中的转录调控 | 第32-34页 |
| 1.3 小鼠肢体的研究概况 | 第34-40页 |
| 1.3.1 小鼠肢体的发育过程 | 第34-37页 |
| 1.3.2 小鼠早期肢体规范的形成 | 第37-39页 |
| 1.3.3 小鼠肢体发育过程中的信号反馈回路 | 第39-40页 |
| 1.4 FGF信号通路的研究概况 | 第40-50页 |
| 1.4.1 FGF信号通路概述 | 第40-43页 |
| 1.4.2 FGF信号通路与早期胚胎发育 | 第43-47页 |
| 1.4.3 FGF信号通路与癌症 | 第47-50页 |
| 第2章 实验材料与研究方法 | 第50-99页 |
| 2.1 实验材料 | 第50-67页 |
| 2.1.1 菌种 | 第50页 |
| 2.1.2 细胞系 | 第50页 |
| 2.1.3 小鼠模型 | 第50-51页 |
| 2.1.4 质粒 | 第51页 |
| 2.1.5 抗体 | 第51-52页 |
| 2.1.6 试剂与试剂盒 | 第52-56页 |
| 2.1.7 实验仪器 | 第56-58页 |
| 2.1.8 实验溶液及其配制 | 第58-67页 |
| 2.2 研究方法 | 第67-99页 |
| 2.2.1 质粒DNA的构建与制备 | 第67-72页 |
| 2.2.2 细胞的复苏、培养与冻存 | 第72-73页 |
| 2.2.3 细胞转染 | 第73页 |
| 2.2.4 shRNA慢病毒的包装 | 第73-74页 |
| 2.2.5 RNA的分离与提取 | 第74-75页 |
| 2.2.6 RNA的逆转录 | 第75页 |
| 2.2.7 实时荧光定量PCR | 第75-77页 |
| 2.2.8 蛋白质免疫印迹法检测蛋白的表达 | 第77-78页 |
| 2.2.9 组织的石蜡包埋与切片 | 第78-79页 |
| 2.2.10 冰冻切片的制备 | 第79页 |
| 2.2.11 组织的H&E染色 | 第79-80页 |
| 2.2.12 阿尔新蓝/茜素红S染色 | 第80页 |
| 2.2.13 免疫组织化学 | 第80-82页 |
| 2.2.14 免疫组织化学荧光染色 | 第82-83页 |
| 2.2.15 贴壁细胞的免疫荧光染色 | 第83-84页 |
| 2.2.16 免疫共沉淀 | 第84-85页 |
| 2.2.17 小鼠基因型的鉴定 | 第85-86页 |
| 2.2.18 TUNEL法检测细胞凋亡 | 第86-87页 |
| 2.2.19 体外激酶实验 | 第87-88页 |
| 2.2.20 成纤维细胞生长因子受体内吞实验 | 第88-89页 |
| 2.2.21 小鼠胚胎成纤维细胞的分离 | 第89-90页 |
| 2.2.22 小鼠胚胎成纤维细胞的永生化处理 | 第90页 |
| 2.2.23 小鼠胎肺Whole-Mount染色 | 第90-91页 |
| 2.2.24 溶酶体红色荧光探针染色 | 第91-92页 |
| 2.2.25 小鼠胚胎X-gal染色 | 第92页 |
| 2.2.26 细胞表面蛋白的生物素化及分析 | 第92-93页 |
| 2.2.27 考马斯亮蓝R250染色 | 第93-94页 |
| 2.2.28 RNA seq样品的处理及生物学注释分析 | 第94页 |
| 2.2.29 小鼠胚胎原位杂交实验 | 第94-98页 |
| 2.2.30 数据处理与统计分析 | 第98-99页 |
| 第3章 实验结果与分析 | 第99-143页 |
| 3.1 LIS1组织特异性敲除小鼠模型的构建 | 第99-100页 |
| 3.2 LIS1在肺上皮细胞中缺失会导致小鼠胚胎肺发育异常 | 第100-107页 |
| 3.3 LIS1在四肢间充质细胞中缺失会导致小鼠胚胎四肢发育异常 | 第107-108页 |
| 3.4 LIS1在肺上皮细胞与四肢间充质细胞中缺失均会导致细胞凋亡 | 第108-111页 |
| 3.5 LIS1缺失会导致FGF信号通路下游靶基因表达异常 | 第111-115页 |
| 3.6 LIS1在肺上皮细胞与四肢间充质细胞中缺失均不影响胚胎的发育模式 | 第115-119页 |
| 3.7 RNA-Seq分析发现LIS1缺失会导致相关信号通路及细胞生理活动异常 | 第119-121页 |
| 3.8 激活RAS-MAPK信号通路能部分修复LIS1缺失所致的发育缺陷 | 第121-126页 |
| 3.9 LIS1在MEF细胞中缺失会导致FGF信号通路激活受阻 | 第126-127页 |
| 3.10 LIS1/NDE1复合物与FGF受体存在相互作用 | 第127-130页 |
| 3.11 LIS1缺失会影响FGF受体蛋白的稳定性及其胞内定位 | 第130-136页 |
| 3.12 LIS1缺失促使FGFR2b靶向通过溶酶体途径降解 | 第136-138页 |
| 3.13 FGFR1促进NDE1酪氨酸磷酸化以及LIS1/NDE1复合物分离 | 第138-143页 |
| 第4章 讨论 | 第143-146页 |
| 参考文献 | 第146-171页 |
| 附录 | 第171-172页 |
| 1. qPCR引物 | 第171页 |
| 2. 小鼠基因型鉴定引物 | 第171-172页 |
| 作者简历与科研成果 | 第172-173页 |
