| 摘要 | 第5-8页 |
| ABSTRACT | 第8-11页 |
| 第一章 绪论 | 第17-53页 |
| 1.1 基因治疗 | 第17-34页 |
| 1.1.1 基因治疗方式 | 第17-20页 |
| 1.1.1.1 基于目的基因直接表达的基因治疗 | 第17-18页 |
| 1.1.1.2 通过反义寡核苷酸或RNAi核酸调节基因表达 | 第18-20页 |
| 1.1.1.3 与蛋白质相互作用的治疗性核酸 | 第20页 |
| 1.1.2 基因递送的障碍 | 第20-25页 |
| 1.1.2.1 核酸的络合 | 第21页 |
| 1.1.2.2 细胞摄取 | 第21-23页 |
| 1.1.2.3 内涵体逃逸 | 第23-24页 |
| 1.1.2.4 细胞核的进入 | 第24-25页 |
| 1.1.3 非病毒基因递送载体 | 第25-33页 |
| 1.1.3.1 脂质类载体 | 第26-28页 |
| 1.1.3.2 聚合物类载体 | 第28-32页 |
| 1.1.3.3 多肽类载体 | 第32-33页 |
| 1.1.3.4 无机材料类载体 | 第33页 |
| 1.1.4 基因治疗的现状与前景展望 | 第33-34页 |
| 1.2 多组分反应及其在聚合物合成方面的应用 | 第34-36页 |
| 1.3 本论文的选题目的与主要研究内容 | 第36-38页 |
| 参考文献 | 第38-53页 |
| 第二章 基于多组分反应合成具有内涵体逃逸功能的高分子基因载体 | 第53-77页 |
| 2.1 引言 | 第53-54页 |
| 2.2 实验部分 | 第54-63页 |
| 2.2.1 化学药品及试剂 | 第54-55页 |
| 2.2.2 细胞株 | 第55页 |
| 2.2.3 实验仪器及设备 | 第55页 |
| 2.2.4 材料合成与表征 | 第55-60页 |
| 2.2.4.1 正丁基异腈和正辛基异腈的合成 | 第55-56页 |
| 2.2.4.2 内涵体逃逸功能单体(ImBAMA和ImOAMA)的合成 | 第56-58页 |
| 2.2.4.3 聚甲基丙烯酸2-(二甲基氨基)乙酯(PDMAEMA)的合成 | 第58-59页 |
| 2.2.4.4 聚合物PDMAEMA-b-PImBAMA和PDMAEMA-b-PImOAMA的合成 | 第59-60页 |
| 2.2.5 单体的聚合反应动力学研究 | 第60-61页 |
| 2.2.6 单体ImBAMA和ImOAMA的酸碱滴定 | 第61页 |
| 2.2.7 聚合物/pDNA纳米复合物的制备 | 第61页 |
| 2.2.8 凝胶电泳实验 | 第61页 |
| 2.2.9 溶血实验 | 第61-62页 |
| 2.2.10 体外转染实验 | 第62页 |
| 2.2.11 细胞毒性研究 | 第62页 |
| 2.2.12 细胞内吞实验 | 第62-63页 |
| 2.2.13 共聚焦激光扫描显微镜(CLSM)观察 | 第63页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第63-72页 |
| 2.3.1 聚合物的设计合成与相关表征 | 第63-68页 |
| 2.3.2 聚合物溶血性能与复合物细胞毒性 | 第68-69页 |
| 2.3.3 复合物在细胞内转染效果评价 | 第69-70页 |
| 2.3.4 复合物转染效果差异性的研究探讨 | 第70-72页 |
| 2.4 小结 | 第72-74页 |
| 参考文献 | 第74-77页 |
| 第三章 pH响应多功能纳米粒子用于肿瘤氧化治疗与化疗协同治疗 | 第77-103页 |
| 3.1 引言 | 第77-79页 |
| 3.2 实验部分 | 第79-86页 |
| 3.2.1 化学药品及试剂 | 第79-80页 |
| 3.2.2 细胞株和小鼠 | 第80页 |
| 3.2.3 实验仪器及设备 | 第80页 |
| 3.2.4 材料合成与表征 | 第80-83页 |
| 3.2.4.1 前药ProCPT的合成 | 第80-81页 |
| 3.2.4.2 肉桂醛单体(MMSD)的合成 | 第81-82页 |
| 3.2.4.3 多功能嵌段共聚物(P3)和对照聚合物(P1和P2)的合成 | 第82-83页 |
| 3.2.5 前药ProCPT的ROS响应测试 | 第83页 |
| 3.2.6 临界胶束浓度(CMC)测量 | 第83-84页 |
| 3.2.7 负载ProCPT的纳米粒子(NPs)的制备 | 第84页 |
| 3.2.8 粒度和多分散指数(PDI)测量 | 第84页 |
| 3.2.9 不同pH下的肉桂醛(CA)和ProCPT释放动力学 | 第84页 |
| 3.2.10 细胞内ROS和CPT的产生情况 | 第84-85页 |
| 3.2.11 体外细胞毒性研究 | 第85页 |
| 3.2.12 纳米粒子的细胞摄取 | 第85页 |
| 3.2.13 纳米粒子的细胞内分布 | 第85页 |
| 3.2.14 小鼠皮下肿瘤模型的构建 | 第85-86页 |
| 3.2.15 小鼠体内肿瘤及各器官中纳米粒子分布情况 | 第86页 |
| 3.2.16 肿瘤组织内ROS和CPT测定 | 第86页 |
| 3.2.17 抑瘤效果评价及组织切片的H&E染色 | 第86页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第86-98页 |
| 3.3.1 聚合物及前药的合成与表征 | 第86-89页 |
| 3.3.2 纳米粒子的形成与性质研究 | 第89页 |
| 3.3.3 肉桂醛及ProCPT的pH响应性释放 | 第89-90页 |
| 3.3.4 纳米粒子的细胞摄取和胞内分布情况 | 第90-91页 |
| 3.3.5 细胞内ROS与CPT的产生 | 第91-93页 |
| 3.3.6 细胞毒性评价 | 第93-94页 |
| 3.3.7 肿瘤靶向富集和ROS及CPT在肿瘤内的产生情况 | 第94-96页 |
| 3.3.8 抑瘤效果与生物安全性评价 | 第96-98页 |
| 3.4 小结 | 第98-99页 |
| 参考文献 | 第99-103页 |
| 第四章 基于硫内酯化学模块化构建多功能高分子基因载体 | 第103-129页 |
| 4.1 引言 | 第103-104页 |
| 4.2 实验部分 | 第104-112页 |
| 4.2.1 化学药品及试剂 | 第104-105页 |
| 4.2.2 细胞株 | 第105页 |
| 4.2.3 实验仪器及设备 | 第105页 |
| 4.2.4 材料合成与表征 | 第105-111页 |
| 4.2.4.1 各硫内酯衍生物的合成 | 第105-107页 |
| 4.2.4.2 聚丙烯酰氧乙基甲基丙烯酸酯(PAOEMA)的合成 | 第107-109页 |
| 4.2.4.3 多功能聚合物的模块化合成 | 第109-111页 |
| 4.2.5 聚合物/pDNA纳米复合物的制备 | 第111页 |
| 4.2.6 复合物的粒径和表面电势测定 | 第111页 |
| 4.2.7 琼脂糖凝胶电泳实验 | 第111页 |
| 4.2.8 各聚合物的细胞毒性实验 | 第111页 |
| 4.2.9 各复合物的细胞转染效果实验 | 第111-112页 |
| 4.2.10 细胞内吞实验 | 第112页 |
| 4.2.11 各复合物的细胞内分布实验 | 第112页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第112-121页 |
| 4.3.1 聚合物的设计合成与基本表征 | 第112-114页 |
| 4.3.2 复合胶束的相关性质研究 | 第114-117页 |
| 4.3.3 基因转染效率与聚合物毒性评价 | 第117-119页 |
| 4.3.4 复合胶束的内吞与细胞内分布情况 | 第119-121页 |
| 4.4 小结 | 第121-123页 |
| 参考文献 | 第123-129页 |
| 第五章 基于酶响应水凝胶的miRNA局部缓释体系用于抑制椎间盘退变 | 第129-167页 |
| 5.1 引言 | 第129-131页 |
| 5.2 实验部分 | 第131-143页 |
| 5.2.1 化学药品及试剂 | 第131-132页 |
| 5.2.2 细胞株与动物 | 第132-133页 |
| 5.2.3 实验仪器及设备 | 第133页 |
| 5.2.4 材料合成与表征 | 第133-138页 |
| 5.2.4.1 L-天冬氨酸-4-苄酯-N-羧基环内酸酐(BLA-NCA)的合成 | 第133-134页 |
| 5.2.4.2 PEG-GPLGVRG-PBLA的合成 | 第134-136页 |
| 5.2.4.3 PEG-GPLGVRG-PBLA-Chole的合成 | 第136-137页 |
| 5.2.4.4 合成PEG-GPLGVRG-PAsp(DET)-Chole (PGPC) | 第137-138页 |
| 5.2.5 纳米复合物的制备 | 第138页 |
| 5.2.6 动态光散射测试 | 第138页 |
| 5.2.7 miRNA/PGPC的MMP-2酶响应性去PEG化 | 第138-139页 |
| 5.2.8 琼脂糖凝胶电泳实验 | 第139页 |
| 5.2.9 水凝胶形成和流变学测试 | 第139页 |
| 5.2.10 水凝胶降解 | 第139页 |
| 5.2.11 miRNA从水凝胶中的释放实验 | 第139-140页 |
| 5.2.12 细胞分离与培养 | 第140页 |
| 5.2.13 miRNA体外的细胞内吞 | 第140页 |
| 5.2.14 miR-29a体外纤维化抑制作用 | 第140-141页 |
| 5.2.15 体内递送分析 | 第141页 |
| 5.2.16 体内的纤维化抑制 | 第141-142页 |
| 5.2.17 提取RNA和实时RT-PCR | 第142页 |
| 5.2.18 蛋白质印迹分析 | 第142页 |
| 5.2.19 荧光素酶报告分析 | 第142页 |
| 5.2.20 共免疫沉淀(CoIP)实验 | 第142-143页 |
| 5.2.21 X射线照相分析 | 第143页 |
| 5.2.22 组织学和免疫组化分析 | 第143页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第143-159页 |
| 5.3.1 含miRNA纳米复合物水凝胶(miRNA/PGPC@HG)的制备及表征 | 第143-146页 |
| 5.3.2 水凝胶的降解研究 | 第146-147页 |
| 5.3.3 细胞内化和基因沉默评估 | 第147-150页 |
| 5.3.4 体内miRNA递送研究 | 第150-152页 |
| 5.3.5 研究miR-29a对纤维化抑制的治疗效果 | 第152-155页 |
| 5.3.6 探究miR-29a抑制纤维化的分子机制 | 第155-159页 |
| 5.4 小结 | 第159-160页 |
| 参考文献 | 第160-167页 |
| 全文总结 | 第167-169页 |
| 下一步工作设想与未来展望 | 第169-171页 |
| 中英文缩略词表 | 第171-173页 |
| 致谢 | 第173-175页 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的其他研究成果 | 第175-177页 |
